Escherichia Coli O157: ຊຸດກວດຫາອາຊິດນິວຄລີອິກ H7 (PCR Fluorescent Probe Method/Lyophilization)
ລາຍລະອຽດຊຸດ:
Cat.No.FP103
ມັນຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອກວດຫາແລະກວດຫາເຊື້ອ E. coli O157:H7 ຢ່າງໄວວາໃນອາຫານ, ອາຫານ, ຕົວຢ່າງນ້ໍາແລະຕົວຢ່າງສິ່ງແວດລ້ອມ.
ລາຍລະອຽດ
ມັນຖືກນໍາໃຊ້ສໍາລັບການກວດພົບແລະການກວດສອບໄວຂອງ E. coli O157:H7 ໃນອາຫານ, ອາຫານ, ຕົວຢ່າງນ້ໍາແລະຕົວຢ່າງສິ່ງແວດລ້ອມ.
[ຫຼັກການທົດສອບ]
ອີງຕາມຫຼັກການຂອງເທກໂນໂລຍີ fluorescent PCR, primers ສະເພາະແລະ Taqman probes ຖືກອອກແບບມາສໍາລັບ gene ສະເພາະຂອງ Escherichia coli O157: H7, ແລະກວດພົບໂດຍເຄື່ອງມື fluorescent PCR, ເພື່ອຮັບຮູ້ການກວດພົບຂອງ Escherichia coli O157: H7 ການກວດສອບຄຸນນະພາບຂອງ DNA.
ເນື້ອໃນຊຸດ
ຫມາຍເຫດ: ROX channel probe ບໍ່ໄດ້ລວມ.
| Cອົງປະກອບ | ຂໍ້ມູນຈໍາເພາະ | Qປະລິມານ |
| Buffer A | ທໍ່ | 1 |
| Buffer B | ທໍ່ | 1 |
| ການຄວບຄຸມທາງບວກ | ທໍ່ | 1 |
| ການຄວບຄຸມທາງລົບ | ທໍ່ | 1 |
ຄາດວ່າຈະໃຊ້
ມັນຖືກນໍາໃຊ້ສໍາລັບ ການກວດພົບແລະການກວດສອບໄວຂອງ E. coli O157:H7 ໃນອາຫານ, ອາຫານ, ຕົວຢ່າງນ້ໍາແລະຕົວຢ່າງສິ່ງແວດລ້ອມ.
ເງື່ອນໄຂການເກັບຮັກສາແລະວັນຫມົດອາຍຸ
ເກັບຮັກສາໄວ້ທີ່ -20 ℃ໃນຄວາມມືດແລະຫຼີກເວັ້ນການແຊ່ແຂງແລະ thawing ຊ້ໍາ.
ໄລຍະເວລາທີ່ຖືກຕ້ອງແມ່ນ 12ເດືອນ, ແລະວັນທີຜະລິດແມ່ນສະແດງຢູ່ໃນການຫຸ້ມຫໍ່ນອກ.
ເຄື່ອງມື ແລະເຄື່ອງບໍລິໂພກ
ເຄື່ອງມື PCR ປະລິມານ fluorescent, ປືນ pipette ແລະຄໍາແນະນໍາການຈັບຄູ່, ເຄື່ອງສັ່ນສະເທືອນ vortex, centrifuge mini.
ການນໍາໃຊ້
1. ການປຸງແຕ່ງຕົວຢ່າງ
1.1 ປະເພດຕົວຢ່າງ: ຊຸດນີ້ແມ່ນເຫມາະສົມສໍາລັບອາຫານ, ອາຫານ, ຕົວຢ່າງນ້ໍາແລະຕົວຢ່າງອື່ນໆທີ່ສົງໃສວ່າມີການປົນເປື້ອນໂດຍ Escherichia coli O157:H7.ສໍາລັບຜະລິດຕະພັນຊີ້ນທີ່ປຸງແຕ່ງເລິກ, ເຄື່ອງດື່ມແລະສານອື່ນໆທີ່ມີເມັດສີ, ພວກເຂົາຕ້ອງໄດ້ຮັບການລ້າງເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການສົ່ງຜົນກະທົບຕໍ່ການລວບລວມສັນຍານ fluorescence.
1.2 ການປຸງແຕ່ງຕົວຢ່າງ: ອ້າງເຖິງ "GB 4789.10-2016 Food Safety National Standard Food Microbiological Examination of Escherichia coli O157: H7 Test" ສໍາລັບການກະກຽມຕົວຢ່າງ, ການເສີມສ້າງວັດທະນະທໍາແລະການໂດດດ່ຽວຂອງ Escherichia coli O157: H7.
- Nການສະກັດເອົາອາຊິດ ucleic
ເອົາ 20 mL ຂອງການແກ້ໄຂ enrichment ໃນທໍ່ centrifuge 1.5 mL, ຕື່ມ 200 μLຂອງ microbial lysate (ຊຸດເພີ່ມເຕີມແມ່ນຕ້ອງການ), vortex ສໍາລັບ 30 ວິນາທີ, centrifuge ໄລຍະສັ້ນໆ, ແລະປະໄວ້.
ຂໍ້ສັງເກດ: ການສະກັດເອົາອາຊິດນິວຄລີອິກອອກຈາກ lysate ຄວນສໍາເລັດພາຍໃນ 10 ນາທີ, ແລະບໍ່ສາມາດເກັບຮັກສາໄວ້ໄດ້ດົນ.
3. ການຂະຫຍາຍອາຊິດນິວຄລີອິກ
3.1 ເປີດເຄື່ອງມື PCR ປະລິມານ fluorescent ສໍາລັບການນໍາໃຊ້.
Buffer A ແລະ Buffer B ຈາກຊຸດ, ເຮັດໃຫ້ພວກມັນລະລາຍຢ່າງລະອຽດ, ແລະ centrifuge ໄລຍະສັ້ນໆ.ເພີ່ມ 18 μL Buffer A ແລະ 2 μL Buffer B ໃສ່ແຕ່ລະທໍ່ປະຕິກິລິຍາ PCR.ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ຕື່ມ 5 mL ຂອງການຄວບຄຸມທາງລົບ, ສະກັດ nucleic acid, ແລະການຄວບຄຸມໃນທາງບວກເຂົ້າໄປໃນທໍ່ຕິກິຣິຍາ PCR, ຝາທໍ່, ແລະ centrifuge ໄລຍະສັ້ນໆ.
3.3 ໂອນທໍ່ຕິກິຣິຍາ PCR ໄປໃສ່ເຄື່ອງ fluorescent PCR, ແລະໃຊ້ຂັ້ນຕອນຕໍ່ໄປນີ້ເພື່ອເຮັດການທົດລອງການຂະຫຍາຍ: ເລືອກ 25 mL ສໍາລັບລະບົບຕິກິຣິຍາ, ເກັບກໍາສັນຍານ fluorescence ທີ່ 60 ° C ສໍາລັບແຕ່ລະວົງຈອນ, ແລະເລືອກ FAM ສໍາລັບຊ່ອງທາງການກວດພົບ.
| ຂັ້ນຕອນ | ໂຄງການ | ຈໍານວນຮອບວຽນ |
| 1 | 37℃ 5 ນາທີ | 1 |
| 2 | 9 5 ℃ 3 ນທ | 1 |
| 3 | 95°C 15ວິ | 40 |
| 60℃ 30s (ເກັບກຳ fluorescence) |
ຄູ່ມືການວິເຄາະບັນຫາ
The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。
ບໍ່ມີ RNA ສາມາດສະກັດໄດ້ຫຼືຜົນຜະລິດຂອງອາຊິດນິວຄລີອິກແມ່ນຕໍ່າ
ປົກກະຕິແລ້ວມີຫຼາຍປັດໃຈທີ່ມີຜົນກະທົບຕໍ່ປະສິດທິພາບການຟື້ນຟູ, ເຊັ່ນ: ເນື້ອໃນ RNA ຕົວຢ່າງ, ວິທີການປະຕິບັດງານ, ປະລິມານ elution, ແລະອື່ນໆ.
ການວິເຄາະສາເຫດທົ່ວໄປ:
1.Ice bath or low-temperature (4 ° C) centrifugation ໃນລະຫວ່າງການປະຕິບັດງານ.
ຄໍາແນະນໍາ: ອຸນຫະພູມຫ້ອງ (15-25 ° C), ການດໍາເນີນງານ, ບໍ່ເຄີຍອາບນ້ໍາກ້ອນແລະ centrifuge ອຸນຫະພູມຕ່ໍາ.
2. ການເກັບຮັກສາຕົວຢ່າງທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງຫຼືການເກັບຮັກສາຕົວຢ່າງສໍາລັບເວລາດົນນານເກີນໄປ.
ຄໍາແນະນໍາ: ເກັບຮັກສາຕົວຢ່າງຢູ່ທີ່ -80 ° C ຫຼືແຊ່ແຂງໃນທາດໄນໂຕຣເຈນຂອງແຫຼວ, ແລະຫຼີກເວັ້ນການນໍາໃຊ້ຊ້ໍາ - thaw;ພະຍາຍາມໃຊ້ຕົວຢ່າງທີ່ເກັບມາສົດໆສໍາລັບການສະກັດເອົາ RNA.
3. lysis ຕົວຢ່າງບໍ່ພຽງພໍ
ຄໍາແນະນໍາ: ກະລຸນາຮັບປະກັນວ່າຕົວຢ່າງແລະການແກ້ໄຂການເຮັດວຽກ (Linear Acrylamide) ໄດ້ຖືກປະສົມຢ່າງລະອຽດແລະ incubated ສໍາລັບ 10 ນາທີທີ່ອຸນຫະພູມຫ້ອງ (15-25 ° C)
4.The eluent ໄດ້ຖືກເພີ່ມບໍ່ຖືກຕ້ອງ
ຄໍາແນະນໍາ: ໃຫ້ແນ່ໃຈວ່າ RNase-Free ddH2O ຖືກເພີ່ມໃສ່ກາງຂອງເຍື່ອຂອງຖັນການຊໍາລະລ້າງ.
5.ປະລິມານທີ່ບໍ່ເໝາະສົມຂອງເອທານອນທີ່ບໍ່ມີນໍ້າໃນ Buffer viRW2
ຄໍາແນະນໍາ: ກະລຸນາປະຕິບັດຕາມຄໍາແນະນໍາ, ເພີ່ມປະລິມານທີ່ຖືກຕ້ອງຂອງເອທານອນທີ່ບໍ່ມີນ້ໍາໃສ່ Buffer viRW2 ແລະປະສົມໃຫ້ເຂົາເຈົ້າດີກ່ອນທີ່ຈະນໍາໃຊ້ຊຸດ.
6. ການນໍາໃຊ້ຕົວຢ່າງທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງ.
ຄໍາແນະນໍາ: 200µl ຂອງຕົວຢ່າງຕໍ່ 500μl ຂອງ Buffer viRL.ປະລິມານຕົວຢ່າງຫຼາຍເກີນໄປຈະເຮັດໃຫ້ອັດຕາການສະກັດເອົາ RNA ຫຼຸດລົງ.
7.Improper elution ປະລິມານຫຼື elution ບໍ່ສົມບູນ.
ຄໍາແນະນໍາ: ປະລິມານ eluent ຂອງຖັນ purification ແມ່ນ 30-50μl;ຖ້າຜົນກະທົບຂອງ elution ແມ່ນບໍ່ພໍໃຈ, ແນະນໍາໃຫ້ເພີ່ມ RNase-Free ddH ທີ່ມີຄວາມຮ້ອນກ່ອນ.2O ແລະຂະຫຍາຍເວລາວາງຢູ່ໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງ, ເຊັ່ນ: 5-10min
8.Purification ຖັນມີ ethanol residue ຫຼັງຈາກ rinsing ໃນ Buffer viRW2.
ຄໍາແນະນໍາ: ຖ້າເອທານອນຍັງຄົງຢູ່ຫຼັງຈາກການລ້າງຢູ່ໃນ Buffer viRW2 ແລະທໍ່ເປົ່າ centrifugation ເປັນເວລາ 2 ນາທີ, ຖັນການຊໍາລະລ້າງສາມາດຖືກປະໄວ້ຢູ່ໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງເປັນເວລາ 5 ນາທີຫຼັງຈາກການຫມູນວຽນທໍ່ເປົ່າເພື່ອເອົາເອທານອນທີ່ຍັງເຫຼືອອອກຢ່າງເຕັມສ່ວນ.
ການເຊື່ອມໂຊມຂອງໂມເລກຸນ RNA ທີ່ບໍລິສຸດ
ຄຸນນະພາບຂອງ RNA ບໍລິສຸດແມ່ນກ່ຽວຂ້ອງກັບປັດໃຈເຊັ່ນການເກັບຮັກສາຕົວຢ່າງ, ການປົນເປື້ອນ RNase, ແລະການດໍາເນີນງານ.
ການວິເຄາະສາເຫດທົ່ວໄປ:
1.ຕົວຢ່າງທີ່ເກັບກໍາບໍ່ໄດ້ບັນທຶກໄວ້ໃນເວລາ.
ຄໍາແນະນໍາ: ຖ້າຕົວຢ່າງບໍ່ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ໃນເວລາຫຼັງຈາກການລວບລວມ, ກະລຸນາເກັບຮັກສາມັນຢູ່ທີ່ -80 ℃ຫຼືໄນໂຕຣເຈນຂອງແຫຼວທັນທີ.ສໍາລັບການສະກັດເອົາໂມເລກຸນ RNA, ພະຍາຍາມໃຊ້ຕົວຢ່າງທີ່ເກັບມາສົດໆທຸກຄັ້ງທີ່ເປັນໄປໄດ້.
2.ເກັບຕົວຢ່າງໄດ້ freezing ແລະ thawing repeatedly.
ຄໍາແນະນໍາ: ຫຼີກເວັ້ນການແຊ່ແຂງແລະ thawing ຊ້ໍາຊ້ອນ (ບໍ່ເກີນຫນຶ່ງຄັ້ງ) ໃນລະຫວ່າງການເກັບຕົວຢ່າງແລະການເກັບຮັກສາ, ຖ້າບໍ່ດັ່ງນັ້ນຜົນຜະລິດຂອງອາຊິດ nucleic ຈະຫຼຸດລົງ.
3.RNase ໄດ້ຖືກນໍາສະເຫນີຢູ່ໃນຫ້ອງປະຕິບັດການຫຼືບໍ່ມີຖົງມືທີ່ໃຊ້ແລ້ວຖິ້ມ, ຫນ້າກາກ, ແລະອື່ນໆ.
ຄໍາແນະນໍາ: ການສະກັດເອົາການທົດລອງໂມເລກຸນ RNA ແມ່ນປະຕິບັດໄດ້ດີທີ່ສຸດໃນຫ້ອງປະຕິບັດການ RNA ແຍກຕ່າງຫາກ, ແລະຕາຕະລາງທົດລອງໄດ້ຖືກອະນາໄມກ່ອນການທົດລອງ.ໃສ່ຖົງມື ແລະໜ້າກາກທີ່ໃຊ້ແລ້ວຖິ້ມໄດ້ໃນລະຫວ່າງການທົດລອງເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການທໍາລາຍ RNA ທີ່ເກີດຈາກການແນະນໍາ RNase.
4.The reagent ແມ່ນປົນເປື້ອນໂດຍ RNase ໃນລະຫວ່າງການນໍາໃຊ້.
ຄຳແນະນຳ: ທົດແທນຊຸດ Viral RNA Isolation Kit ໃໝ່ສຳລັບການທົດລອງທີ່ກ່ຽວຂ້ອງ.
5.ການປົນເປື້ອນ RNase ຂອງທໍ່ centrifuge, ຄໍາແນະນໍາ pipette, ແລະອື່ນໆຄໍາແນະນໍາ: ໃຫ້ແນ່ໃຈວ່າທໍ່ centrifuge, ຄໍາແນະນໍາ pipette, ແລະ pipettes ທັງຫມົດແມ່ນ RNase-Free.
ໂມເລກຸນ RNA ທີ່ບໍລິສຸດສົ່ງຜົນກະທົບຕໍ່ການທົດລອງທາງລຸ່ມ
ໂມເລກຸນ RNA ທີ່ຖືກຊໍາລະໂດຍຖັນການຊໍາລະລ້າງຈະສົ່ງຜົນກະທົບຕໍ່ການທົດລອງທາງລຸ່ມຖ້າມີ ions ເກືອຫຼືທາດໂປຼຕີນຫຼາຍເກີນໄປ, ເຊັ່ນ: reverse transcription, Northern Blot, ແລະອື່ນໆ.
1.ມີ ions ເກືອທີ່ຍັງເຫຼືອຢູ່ໃນໂມເລກຸນ RNA eluted.
ຄໍາແນະນໍາ: ໃຫ້ແນ່ໃຈວ່າປະລິມານທີ່ຖືກຕ້ອງຂອງ ethanol ທີ່ບໍ່ມີນ້ໍາໄດ້ຖືກເພີ່ມໃສ່ Buffer viRW2, ແລະລ້າງຄໍລໍາຊໍາລະລ້າງສອງຄັ້ງຕາມຄວາມໄວຂອງ centrifugation ທີ່ຖືກຕ້ອງຕາມຄໍາແນະນໍາການດໍາເນີນງານ; ຖ້າຍັງມີທາດເກືອທີ່ເຫລືອຢູ່, ທ່ານສາມາດເພີ່ມ Buffer viRW2 ໃສ່ຖັນການຊໍາລະ, ແລະປະໄວ້ຢູ່ທີ່ອຸນຫະພູມຫ້ອງສໍາລັບ 5 ນາທີ.ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ດໍາເນີນການ centrifugation ເພື່ອເອົາການປົນເປື້ອນ ions ເກືອໃນຂອບເຂດທີ່ຍິ່ງໃຫຍ່ທີ່ສຸດ
2.ມີເອທານອນທີ່ຍັງເຫຼືອຢູ່ໃນໂມເລກຸນ RNA eluted
ຄໍາແນະນໍາ: ເມື່ອຢືນຢັນວ່າຄໍລໍາການຊໍາລະລ້າງໄດ້ຖືກລ້າງໂດຍ Buffer viRW2, ດໍາເນີນການ centrifugation ທໍ່ເປົ່າຕາມຄວາມໄວ centrifugal ຕາມຄໍາແນະນໍາການດໍາເນີນງານ.ຖ້າຍັງມີເອທານອນທີ່ຍັງເຫຼືອຢູ່, ມັນສາມາດປະໄວ້ 5 ນາທີໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງຫຼັງຈາກການ centrifugation ທໍ່ເປົ່າເພື່ອເອົາເອທານອນທີ່ຍັງເຫຼືອອອກໄປໃນຂອບເຂດສູງສຸດ.
ຄູ່ມືການສອນ:
Viral RNA Isolation Kit ຄູ່ມືແນະນໍາ
