Cell Total RNA Isolation Kit ຊຸດກວດລ້າງການແຍກ RNA ທັງໝົດຈາກເຊລ
ລາຍລະອຽດຊຸດ:
RNA ທັງ ໝົດ ທີ່ບໍລິສຸດແລະມີຄຸນນະພາບສູງສາມາດໄດ້ຮັບຈາກຈຸລັງການລ້ຽງຕ່າງໆພາຍໃນ 11 ນາທີ.
RNase-Free
ເຮັດວຽກຢູ່ໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງ (15-25 ℃)
ດ້ວຍຖັນ DNA-ທຳຄວາມສະອາດ
ຜົນຜະລິດ RNA ສູງ
ໄວ: ສໍາເລັດການສະກັດໃນ 11 ນາທີ
ຄວາມປອດໄພ: ບໍ່ມີສານເຄມີອິນຊີ
ລາຍລະອຽດ
ຊຸດນີ້ໃຊ້ຖັນ spin ແລະສູດທີ່ພັດທະນາໂດຍ Foregene, ເຊິ່ງປະສິດທິພາບສາມາດສະກັດ RNA ທັງຫມົດທີ່ມີຄວາມບໍລິສຸດແລະຄຸນນະພາບສູງຈາກຈຸລັງທີ່ລ້ຽງຢູ່ໃນແຜ່ນ 96, 24, 12, ແລະ 6 ດີ.
ຊຸດດັ່ງກ່າວສະຫນອງຄໍລໍາທໍາຄວາມສະອາດ DNA ທີ່ມີປະສິດທິພາບ, ເຊິ່ງສາມາດແຍກທາດ supernatant ແລະ cell lysate, ຜູກມັດແລະເອົາ DNA genomic.ການດໍາເນີນງານແມ່ນງ່າຍດາຍແລະປະຫຍັດເວລາ.
Tຖັນ RNA ເທົ່ານັ້ນຂອງລາວສາມາດຜູກມັດ RNA ໄດ້ຢ່າງມີປະສິດທິພາບດ້ວຍສູດທີ່ເປັນເອກະລັກ.ຈໍານວນຕົວຢ່າງຈໍານວນຫລາຍສາມາດຖືກປຸງແຕ່ງພ້ອມໆກັນ.
ອົງປະກອບຊຸດ
| ອົງປະກອບຊຸດ | RE-03111 | RE-03114 |
| 50 ທ | 200 ທ | |
| Buffer cRL1* | 25 ມລ | 100 ມລ |
| Buffer cRL2 | 15 ມລ | 60 ມລ |
| Buffer RW1* | 25 ມລ | 100 ມລ |
| Buffer RW2 | 24 ມລ | 96 ມລ |
| RNase-Free ddH2O | 10 ມລ | 40 ມລ |
| ຖັນ RNA ເທົ່ານັ້ນ | 50 | 200 |
| ຖັນ DNA-ທໍາຄວາມສະອາດ | 50 | 200 |
| ຄໍາແນະນໍາ | 1 | 1 |
*ກະລຸນາໃສ່ຖົງມື ແລະໃຊ້ມາດຕະການປ້ອງກັນໃນລະຫວ່າງການປະຕິບັດງານ ເນື່ອງຈາກ Buffer cRL1 ແລະ Buffer RW1 ມີເກືອ chaotropic ທີ່ລະຄາຍເຄືອງ.
ຄຸນນະສົມບັດແລະຂໍ້ດີ
■ຂະບວນການທັງຫມົດແມ່ນດໍາເນີນຢູ່ໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງ (15-25 ℃), ໂດຍບໍ່ມີການອາບນ້ໍາກ້ອນແລະ centrifugation ຕ່ໍາອຸນຫະພູມ.
■ ຊຸດທັງໝົດແມ່ນ RNase-Free, ບໍ່ຈໍາເປັນຕ້ອງກັງວົນກ່ຽວກັບການເຊື່ອມໂຊມຂອງ RNA.
■ ຖັນ DNA-ທໍາຄວາມສະອາດຜູກມັດ DNA ໂດຍສະເພາະ, ດັ່ງນັ້ນຊຸດສາມາດເອົາການປົນເປື້ອນຂອງ DNA genomic ໂດຍບໍ່ມີການເພີ່ມ DNase ເພີ່ມເຕີມ.
■ ຜົນຜະລິດ RNA ສູງ: ຖັນ RNA ເທົ່ານັ້ນ ແລະສູດທີ່ເປັນເອກະລັກສາມາດຊໍາລະ RNA ໄດ້ຢ່າງມີປະສິດທິພາບ.
■ ຄວາມໄວໄວ: ງ່າຍຕໍ່ການປະຕິບັດງານແລະສາມາດສໍາເລັດໃນ 11 ນາທີ.
■ ຄວາມປອດໄພ: ບໍ່ຈໍາເປັນຕ້ອງໃຊ້ສານຕ້ານອະນຸມູນອິດສະລະ.
■ ຄຸນະພາບສູງ: RNA ບໍລິສຸດແມ່ນມີຄວາມບໍລິສຸດສູງ, ບໍ່ມີທາດໂປຼຕີນແລະສິ່ງປົນເປື້ອນອື່ນໆ, ແລະສາມາດຕອບສະຫນອງການທົດລອງຕ່າງໆຕໍ່ມາ.
ຄໍາຮ້ອງສະຫມັກຊຸດ
ມັນເຫມາະສົມສໍາລັບການສະກັດເອົາແລະການຊໍາລະລ້າງ RNA ທັງຫມົດຈາກຈຸລັງວັດທະນະທໍາໃນແຜ່ນ 96, 24, 12, ແລະ 6 ດີ.
ກະແສວຽກ
ແຜນວາດ
ແຜນວາດແບັດເຕີລີ agarose gel ຂອງ Cell Total RNA Isolation Kit ປິ່ນປົວດ້ວຍຕົວເລກທີ່ແຕກຕ່າງກັນຂ້າງເທິງຂອງຈຸລັງ, ປະລິມານ 20μl elution, ໃຊ້ເວລາ 2μl purified RNA ທັງຫມົດ 1%.
ການເກັບຮັກສາແລະອາຍຸການເກັບຮັກສາ
ຊຸດສາມາດເກັບຮັກສາໄວ້ສໍາລັບ 12 ເດືອນໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງ (15-25 ℃) ຫຼື 2-8 ℃ສໍາລັບເວລາດົນກວ່າ (24 ເດືອນ).
Buffer cRL1 ສາມາດເກັບຮັກສາໄວ້ທີ່ 4 ℃ສໍາລັບ 1 ເດືອນຫຼັງຈາກເພີ່ມ 2-hydroxy-1-ethanethiol (ທາງເລືອກ).
RNA ບໍ່ໄດ້ຖືກສະກັດອອກຫຼື RNA ຜົນຜະລິດແມ່ນຕໍ່າ
ມີຫຼາຍປັດໃຈທີ່ມີຜົນກະທົບຕໍ່ປະສິດທິພາບການຟື້ນຕົວ, ເຊັ່ນ: ເນື້ອເຍື່ອຂອງ RNA ຕົວຢ່າງ, ວິທີການປະຕິບັດງານ, ປະລິມານ elution, ແລະອື່ນໆ.
1. ການອາບນ້ຳກ້ອນ ຫຼື ການສູນພັນແບບ cryogenic (4 °C) ໄດ້ຖືກປະຕິບັດໃນລະຫວ່າງການປະຕິບັດງານ.
ຄໍາແນະນໍາ: ປະຕິບັດໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງ (15-25 ° C) ຕະຫຼອດຂະບວນການທັງຫມົດ, ຫ້າມອາບນ້ໍາກ້ອນແລະ centrifuge ໃນອຸນຫະພູມຕ່ໍາ.
2. ການເກັບຮັກສາຕົວຢ່າງທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງຫຼືເວລາເກັບຕົວຢ່າງຫຼາຍເກີນໄປ.
ຄຳແນະນຳ: ເກັບຮັກສາຕົວຢ່າງໄວ້ທີ່ -80 °C ຫຼື ແຊ່ແຂງໃນທາດໄນໂຕຣເຈນຂອງແຫຼວ ແລະ ຫຼີກລ່ຽງການໃຊ້ການແຊ່ແຂງຊ້ຳໆ;ພະຍາຍາມໃຊ້ເນື້ອເຍື່ອສົດຫຼືຈຸລັງວັດທະນະທໍາສໍາລັບການສະກັດເອົາ RNA.
3. ຕົວຢ່າງ lysis ບໍ່ພຽງພໍ.
ຄໍາແນະນໍາ: ໃນເວລາທີ່ເຮັດໃຫ້ເນື້ອເຍື່ອ homogenizing, ໃຫ້ແນ່ໃຈວ່າເນື້ອເຍື່ອແມ່ນ homogenized ພຽງພໍແລະຈຸລັງຂອງຈຸລັງໄດ້ຖືກແບ່ງອອກຢ່າງພຽງພໍເພື່ອອະທິບາຍການປ່ອຍ RNA.
4. eluent ບໍ່ໄດ້ຖືກເພີ່ມຢ່າງຖືກຕ້ອງ.
ຄໍາແນະນໍາ: ຢືນຢັນວ່າ RNase-Free ddH2O ແມ່ນເພີ່ມ dropwise ກັບກາງຂອງເຍື່ອຄໍລໍາຊໍາລະລ້າງ.
5. ປະລິມານທີ່ຖືກຕ້ອງຂອງເອທານອນຢ່າງແທ້ຈິງບໍ່ໄດ້ຖືກເພີ່ມໃສ່ Buffer RL2 ຫຼື Buffer RW2.
ຄໍາແນະນໍາ: ປະຕິບັດຕາມຄໍາແນະນໍາ, ເພີ່ມປະລິມານທີ່ຖືກຕ້ອງຂອງເອທານອນຢ່າງແທ້ຈິງໃສ່ Buffer RL2 ແລະ Buffer RW2 ແລະປະສົມໃຫ້ດີກ່ອນທີ່ຈະໃຊ້ຊຸດ.
6. ປະລິມານຕົວຢ່າງຂອງຈຸລັງແມ່ນບໍ່ເຫມາະສົມ.
ຄໍາແນະນໍາ: ໃຊ້ເນື້ອເຍື່ອ 10-20 mg ຫຼື (1-5) × 106ຈຸລັງຕໍ່ 500 μl buffer RL1, ຍ້ອນວ່າການນໍາໃຊ້ເນື້ອເຍື່ອຫຼາຍເກີນໄປສາມາດເຮັດໃຫ້ການສະກັດເອົາ RNA ຫຼຸດລົງ.
7. ປະລິມານ elution ທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງ ຫຼື elution ບໍ່ຄົບຖ້ວນ.
ຄໍາແນະນໍາ: ປະລິມານ elution ຂອງຖັນ purification ແມ່ນ 50-200 μl;ຖ້າຜົນກະທົບຂອງ elution ບໍ່ເປັນທີ່ພໍໃຈ, ແນະນໍາໃຫ້ຂະຫຍາຍເວລາການຈັດວາງອຸນຫະພູມຫ້ອງຫຼັງຈາກເພີ່ມ RNase-Free ddH preheated.2O, ເຊັ່ນ: ສໍາລັບ 5-10 ນາທີ.
8.The ຖັນ purification ມີ ethanol residue ຫຼັງຈາກ Buffer RW2 ລ້າງ.
ຄໍາແນະນໍາ: ຖ້າມີສານຕົກຄ້າງຂອງເອທານອນຫຼັງຈາກການລ້າງ Buffer RW2, ທໍ່ເປົ່າ centrifugation ສໍາລັບ 1 ນາທີ, ເວລາສໍາລັບການປະຕິບັດງານຂອງທໍ່ເປົ່າສາມາດເພີ່ມຂຶ້ນເປັນ 2 ນາທີ, ຫຼືຖັນການຊໍາລະລ້າງສາມາດຖືກວາງໄວ້ທີ່ອຸນຫະພູມຫ້ອງເປັນເວລາ 5 ນາທີເພື່ອເອົາເອທານອນທີ່ຕົກຄ້າງອອກຢ່າງພຽງພໍ.
RNA ບໍລິສຸດຖືກທໍາລາຍ
ຄຸນນະພາບຂອງ RNA ບໍລິສຸດແມ່ນກ່ຽວຂ້ອງກັບປັດໃຈເຊັ່ນ: ການເກັບຮັກສາຕົວຢ່າງ, ການປົນເປື້ອນ RNase, ແລະການຫມູນໃຊ້, ແລະອື່ນໆ.
1. ຕົວຢ່າງຂອງເນື້ອເຍື່ອບໍ່ໄດ້ຖືກເກັບຮັກສາໄວ້ໃນເວລາ.
ຄໍາແນະນໍາ: ຖ້າຕົວຢ່າງເນື້ອເຍື່ອຫຼືຈຸລັງບໍ່ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ໃນລັກສະນະທີ່ທັນເວລາຫຼັງຈາກການລວບລວມ, ທັນທີເກັບຮັກສາໄວ້ cryopreserve ຢູ່ທີ່ -80 ° C ຫຼືໄນໂຕຣເຈນຂອງແຫຼວ.ເພື່ອສະກັດ RNA, ໃຫ້ໃຊ້ເນື້ອເຍື່ອ ຫຼືຈຸລັງທີ່ເອົາມາໃໝ່ທຸກຄັ້ງທີ່ເປັນໄປໄດ້.
2. ການແຊ່ແຂງຊ້ຳຄືນຂອງຕົວຢ່າງເນື້ອເຍື່ອ.
ຄໍາແນະນໍາ: ເມື່ອເກັບຕົວຢ່າງເນື້ອເຍື່ອ, ມັນດີທີ່ສຸດທີ່ຈະຕັດມັນອອກເປັນຕ່ອນນ້ອຍເພື່ອເກັບຮັກສາ, ແລະເອົາຫນຶ່ງຂອງຕ່ອນໃນເວລາທີ່ນໍາໃຊ້ພວກມັນເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການແຊ່ແຂງຊ້ໍາອີກຄັ້ງແລະການເຊື່ອມໂຊມຂອງ RNA.
3. RNase ແມ່ນແນະນໍາຫຼືບໍ່ໃສ່ຖົງມືທີ່ຖິ້ມແລ້ວ, ຫນ້າກາກ, ແລະອື່ນໆໃນລະຫວ່າງການປະຕິບັດງານ.
ຄໍາແນະນໍາ: ການທົດລອງການສະກັດເອົາ RNA ແມ່ນປະຕິບັດໄດ້ດີທີ່ສຸດໃນຫ້ອງການຈັດການ RNA ແຍກຕ່າງຫາກແລະຕາຕະລາງໄດ້ຖືກອະນາໄມກ່ອນການທົດລອງ.
ໃສ່ຖົງມື ແລະໜ້າກາກທີ່ໃຊ້ແລ້ວຖິ້ມໄດ້ໃນລະຫວ່າງການທົດລອງ ເພື່ອຫຼຸດຜ່ອນການເສື່ອມຂອງ RNA ທີ່ເກີດຈາກການນຳ RNase.
4. Reagents ແມ່ນປົນເປື້ອນດ້ວຍ RNase ໃນລະຫວ່າງການໃຊ້.
ຄຳແນະນຳ: ທົດແທນຊຸດການແຍກ RNA ທັງໝົດຂອງສັດໃໝ່ສຳລັບການທົດລອງທີ່ກ່ຽວຂ້ອງ.
5. ທໍ່ centrifuge, ຄໍາແນະນໍາ, ແລະອື່ນໆທີ່ໃຊ້ໃນການຫມູນໃຊ້ RNA ຖືກປົນເປື້ອນດ້ວຍ RNase.
ຄໍາແນະນໍາ: ຢືນຢັນວ່າທໍ່ centrifuge, ຄໍາແນະນໍາ, pipettes, ແລະອື່ນໆທີ່ໃຊ້ໃນການສະກັດເອົາ RNA ແມ່ນທັງຫມົດ RNase-Free.
RNA ທີ່ໄດ້ຮັບບໍລິສຸດມີຜົນກະທົບການທົດລອງລຸ່ມນ້ໍາ
RNA purified ໂດຍຖັນ purification, ຖ້າຫາກວ່າ ions ເກືອ, ເນື້ອໃນທາດໂປຼຕີນມີຂະຫນາດໃຫຍ່ເກີນໄປຈະສົ່ງຜົນກະທົບຕໍ່ການທົດລອງ downstream, ເຊັ່ນ: reverse transcription, Northern Blot et al.
1. RNA elutioned ມີສານຕົກຄ້າງ ion ເກືອ.
ຄໍາແນະນໍາ: ຢືນຢັນວ່າປະລິມານທີ່ຖືກຕ້ອງຂອງ ethanol ໄດ້ຖືກເພີ່ມໃສ່ Buffer RW2 ແລະປະຕິບັດການລ້າງຖັນ 2 purification ໃນຄວາມໄວ centrifugal ທີ່ຊີ້ໃຫ້ເຫັນສໍາລັບການດໍາເນີນງານ;ຖ້າມີ ion ເກືອຕົກຄ້າງ, ອອກຈາກຄໍລໍາການຊໍາລະລ້າງໃຫ້ Buffer RW2 ເປັນເວລາ 5 ນາທີຢູ່ທີ່ອຸນຫະພູມຫ້ອງແລະດໍາເນີນການ centrifugation ເພື່ອເພີ່ມການກໍາຈັດການປົນເປື້ອນຂອງເກືອ.
2. ສານຕົກຄ້າງຂອງເອທານອນໃນ elutioned RNA.
ຄໍາແນະນໍາ: ຢືນຢັນວ່າຫຼັງຈາກການລ້າງ buffer RW2, ດໍາເນີນການ centrifugation tube ເປົ່າໃນຄວາມໄວ centrifugation ຊີ້ບອກສໍາລັບການດໍາເນີນງານ, ເພີ່ມເວລາຂອງການດໍາເນີນງານ centrifugation ທໍ່ເປົ່າເປັນ 2 ນາທີຖ້າຫາກວ່າຍັງມີ ethanol ຕົກຄ້າງ, ຫຼືປະໄວ້ຢູ່ທີ່ອຸນຫະພູມຫ້ອງ 5 m.
