Cell Direct RT qPCR Kit—SYBR GREEN I Direct Cell Lysis Cell ພ້ອມຊຸດ qRT-PCR ຂັ້ນຕອນດຽວ
ລາຍລະອຽດ
ຊຸດນີ້ໃຊ້ລະບົບ lysis buffer ທີ່ເປັນເອກະລັກທີ່ສາມາດປ່ອຍ RNA ອອກຈາກຕົວຢ່າງເຊນທີ່ລ້ຽງໄວ້ຢ່າງໄວວາສໍາລັບປະຕິກິລິຍາ RT-qPCR, ດັ່ງນັ້ນການກໍາຈັດຂະບວນການຊໍາລະລ້າງ RNA ທີ່ໃຊ້ເວລາຫຼາຍແລະເຮັດວຽກຫຼາຍ.ແມ່ແບບ RNA ສາມາດໄດ້ຮັບໃນເວລາພຽງ 7 ນາທີ.ໄດ້ 5×Direct RT Mix ແລະ 2×ໂດຍກົງ qPCR Mix-SYBR reagents ທີ່ສະຫນອງໂດຍຊຸດສາມາດໄດ້ຮັບຜົນໄດ້ຮັບ PCR ປະລິມານໃນເວລາທີ່ແທ້ຈິງຢ່າງໄວວາແລະປະສິດທິຜົນ.
5×Direct RT Mix ແລະ 2×ໂດຍກົງ qPCR Mix-SYBR ມີຄວາມທົນທານຕໍ່ inhibitor ທີ່ເຂັ້ມແຂງ, ແລະ lysate ຂອງຕົວຢ່າງສາມາດນໍາໃຊ້ເປັນແມ່ແບບສໍາລັບ RT-qPCR ໂດຍກົງ.ຊຸດນີ້ປະກອບດ້ວຍ RNA ທີ່ມີຄວາມສອດຄ່ອງສູງຂອງ Foregene reverse transcriptase, ແລະ Hot D-Taq DNA polymerase, dNTPs, MgCl2, ຕິກິຣິຍາ buffer, PCR optimizer ແລະ stabilizer.
ຂໍ້ມູນຈໍາເພາະ
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
ອົງປະກອບຊຸດ
| ສ່ວນ I | Buffer CL |
| Foregene Protease Plus II | |
| Buffer ST | |
| ພາກທີ II | DNA Eraser |
| 5× Direct RT Mix | |
| 2× ກົງ qPCR Mix-SYBR | |
| 50× ROX Reference Dye | |
| RNase-Free ddH2O | |
| ຄໍາແນະນໍາ | |
ຄຸນນະສົມບັດແລະຂໍ້ດີ
■ງ່າຍດາຍແລະປະສິດທິຜົນ: ດ້ວຍເຕັກໂນໂລຊີ Cell Direct RT, ຕົວຢ່າງ RNA ສາມາດໄດ້ຮັບໃນພຽງແຕ່ 7 ນາທີ.
■ ຄວາມຕ້ອງການຕົວຢ່າງມີຂະຫນາດນ້ອຍ, ຕ່ໍາສຸດ 10 ຈຸລັງສາມາດທົດສອບໄດ້.
■ ກະແສໄຟຟ້າສູງ: ມັນສາມາດກວດຫາ RNA ໄດ້ໄວໃນເຊລທີ່ລ້ຽງຢູ່ໃນແຜ່ນ 384, 96, 24, 12, 6 ດີ.
■ DNA Eraser ສາມາດເອົາ genomes ທີ່ປ່ອຍອອກມາໄດ້ຢ່າງໄວວາ, ຫຼຸດຜ່ອນຜົນກະທົບຢ່າງຫຼວງຫຼາຍຕໍ່ຜົນການທົດລອງຕໍ່ໄປ.
■ ລະບົບ RT ແລະ qPCR ທີ່ຖືກປັບປຸງໃຫ້ດີຂຶ້ນ ເຮັດໃຫ້ການຖອດຂໍ້ຄວາມແບບປີ້ນກັບ RT-PCR ສອງຂັ້ນຕອນມີປະສິດທິພາບ ແລະ PCR ມີຄວາມສະເພາະເຈາະຈົງ, ແລະທົນທານຕໍ່ກັບ RT-qPCR ປະຕິກິລິຍາ inhibitors.
ຄໍາຮ້ອງສະຫມັກຊຸດ
ຂອບເຂດການນຳໃຊ້: ເຊລທີ່ລ້ຽງ.
- RNA ປ່ອຍອອກມາໂດຍ lysis ຕົວຢ່າງ: ໃຊ້ໄດ້ກັບແມ່ແບບ RT-qPCR ຂອງຊຸດນີ້ເທົ່ານັ້ນ.
- ຊຸດສາມາດນໍາໃຊ້ໄດ້ສໍາລັບຈຸດປະສົງດັ່ງຕໍ່ໄປນີ້: ການວິເຄາະການສະແດງອອກຂອງເຊື້ອ, ການກວດສອບຜົນກະທົບຂອງ siRNA-mediated gene silencing, ການກວດສອບຢາເສບຕິດ, ແລະອື່ນໆ.
ແຜນວາດ
ການເກັບຮັກສາແລະອາຍຸການເກັບຮັກສາ
ສ່ວນ I ຂອງຊຸດນີ້ຄວນເກັບຮັກສາໄວ້ຢູ່ທີ່ 4 ℃;ພາກທີ II ຄວນເກັບຮັກສາໄວ້ທີ່ -20 ℃.
Foregene Protease Plus II ຄວນຖືກເກັບໄວ້ຢູ່ທີ່ 4℃, ບໍ່ freeze ຢູ່ -20 ℃.
Reagent 2×ໂດຍກົງ qPCR Mix-SYBR ຄວນຖືກເກັບໄວ້ຢູ່ທີ່ -20℃ໃນຄວາມມືດ;ຖ້າໃຊ້ເລື້ອຍໆ, ມັນຍັງສາມາດເກັບຮັກສາໄວ້ຢູ່ທີ່ 4℃ ສໍາລັບການເກັບຮັກສາໄລຍະສັ້ນ (ໃຊ້ເຖິງພາຍໃນ 10 ມື້).
ຫຼັກການການອອກແບບ primer PCR ໃນເວລາຈິງ
Forward Primer ແລະ Reverse Primer
ສໍາລັບ PCR ທີ່ແທ້ຈິງ, ການອອກແບບ primer ແມ່ນມີຄວາມສໍາຄັນຫຼາຍ.Primers ແມ່ນກ່ຽວຂ້ອງກັບສະເພາະແລະປະສິດທິພາບຂອງການຂະຫຍາຍ PCR, ແລະສາມາດໄດ້ຮັບການອອກແບບໂດຍອ້າງອີງໃສ່ຫຼັກການດັ່ງຕໍ່ໄປນີ້:
ຄວາມຍາວຂອງ primer: 18-30bp.
ເນື້ອໃນ GC: 40-60%.
ຄ່າ Tm: ຊອບແວອອກແບບ primer ເຊັ່ນ Primer 5 ສາມາດໃຫ້ຄ່າ Tm ຂອງ primer.ຄ່າ Tm ຂອງ primers ເທິງນ້ໍາແລະລຸ່ມຄວນຈະໃກ້ຊິດເທົ່າທີ່ເປັນໄປໄດ້.ສູດການຄິດໄລ່ Tm ຍັງສາມາດຖືກນໍາໃຊ້: Tm = 4 °C (G + C) + 2 ° C (A + T).ເມື່ອປະຕິບັດ PCR, ອຸນຫະພູມຕ່ໍາກວ່າຄ່າ primer Tm ຂອງ 5 ° C ໂດຍທົ່ວໄປແມ່ນເລືອກເປັນອຸນຫະພູມ annealing (ການເພີ່ມຂຶ້ນທີ່ສອດຄ້ອງກັນຂອງອຸນຫະພູມ annealing ສາມາດເພີ່ມຄວາມສະເພາະຂອງຕິກິຣິຍາ PCR).
ຜະລິດຕະພັນ Primers ແລະ PCR:
ການອອກແບບ primer PCR ຄວາມຍາວຜະລິດຕະພັນຂະຫຍາຍແມ່ນມັກ 100-150bp.
ການອອກແບບ primers ໃນເຂດໂຄງສ້າງຮອງຂອງແມ່ແບບຄວນໄດ້ຮັບການຫຼີກເວັ້ນຫຼາຍເທົ່າທີ່ເປັນໄປໄດ້.
ຫຼີກລ້ຽງການສ້າງຖານເສີມ 2 ຫຼືຫຼາຍກວ່າລະຫວ່າງ 3′ ປາຍຂອງ primers ເທິງນ້ໍາແລະລຸ່ມນ້ໍາ.
Primer 3′ ຖານ terminal ບໍ່ສາມາດມີ 3 G ຫຼື C ຕິດຕໍ່ກັນເພີ່ມເຕີມ.
primers ຕົວເອງບໍ່ສາມາດມີໂຄງສ້າງເສີມ, ຖ້າບໍ່ດັ່ງນັ້ນໂຄງສ້າງ hairpin ຈະຖືກສ້າງຕັ້ງຂຶ້ນ, ຜົນກະທົບຕໍ່ການຂະຫຍາຍ PCR.
ATCG ຄວນແຈກຢາຍເທົ່າທີ່ເປັນໄປໄດ້ໃນລໍາດັບ primer, ແລະ 3′ terminal base ຄວນຖືກຫລີກລ້ຽງເປັນ T.
ເອກະສານຊ້ອນທ້າຍ 1: Cell Direct RT-qPCR ຊຸດສ່ວນປະກອບຂອງຊຸດເສີມ
1.ການແກ້ໄຂຈຸລັງ Lysis
|
| |||
| ອົງປະກອບຊຸດ (ລະບົບ lysis 24 ດີ / ດີ) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 ທ | 500 ທ | ||
| ສ່ວນI | Buffer CL | 20 ມລ | 100 ມລ |
| Foregene Protease Plus II | 400 ມລ | 1 ມລ × 2 | |
| Buffer ST | 1 ມລ × 2 | 10 ມລ | |
| ສ່ວນII | DNA Eraser | 400 ມລ | 1 ມລ × 2 |
2.RT ປະສົມ
|
| |
| ອົງປະກອບຊຸດ (ລະບົບປະຕິກິລິຍາ 20 μl) | DRT-01011-B1 |
| 200 ທ | |
| 5× Direct RT Mix | 800 ມລ |
| RNase-Free ddH2O | 1.7 ມລ × 2 |
|
| ||
| ອົງປະກອບຊຸດ (ລະບົບປະຕິກິລິຍາ 20 μl) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 ທ | 1000 ທ | |
| 2× ກົງ qPCR Mix-SYBR | 1 ມລ × 2 | 1.7 ມລ × 6 |
| 50× ROX Reference Dye | 40 ມລ | 200 ມລ |
| RNase-Free ddH2O | 1.7 ມລ | 10 ມລ |
ຄູ່ມືການສອນ:
