Animal Total RNA Isolation Kit ຊຸດສະກັດ ແລະ ຊຳລະລ້າງ RNA ທັງໝົດສຳລັບເນື້ອເຍື່ອ ແລະຈຸລັງສັດ
ລາຍລະອຽດຊຸດ:
ຢ່າງໄວວາແລະປະສິດທິພາບສະກັດ RNA ທັງຫມົດທີ່ມີຄວາມບໍລິສຸດແລະມີຄຸນນະພາບສູງຈາກເນື້ອເຍື່ອສັດຕ່າງໆ.
ບໍ່ຈໍາເປັນຕ້ອງກັງວົນກ່ຽວກັບການເຊື່ອມໂຊມຂອງ RNA.ລະບົບທັງຫມົດແມ່ນ RNase-Free
ເອົາ DNA ອອກຢ່າງມີປະສິດທິພາບໂດຍໃຊ້ຖັນ DNA-ທໍາຄວາມສະອາດ
ເອົາ DNA ໂດຍບໍ່ຕ້ອງເພີ່ມ DNA
ງ່າຍດາຍ - ການດໍາເນີນງານທັງຫມົດແມ່ນສໍາເລັດຢູ່ໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງ
ໄວ - ການດໍາເນີນງານສາມາດສໍາເລັດໃນ 30 ນາທີ
ປອດໄພ - ບໍ່ມີສານຕ້ານອະນຸມູນອິດສະລະທີ່ໃຊ້
ຄວາມບໍລິສຸດສູງ—OD260/280≈1.8-2.1
ລາຍລະອຽດຊຸດ
50 Preps, 200 Preps
ຊຸດນີ້ໃຊ້ຖັນ spin ແລະສູດພັດທະນາໂດຍບໍລິສັດຂອງພວກເຮົາ, ເຊິ່ງສາມາດສະກັດ RNA ທັງຫມົດທີ່ມີຄວາມບໍລິສຸດແລະມີຄຸນນະພາບສູງຈາກເນື້ອເຍື່ອສັດຕ່າງໆທີ່ມີປະສິດຕິພາບສູງ. ມັນສະຫນອງຄໍລໍາທໍາຄວາມສະອາດ DNA ທີ່ມີປະສິດທິພາບ, ເຊິ່ງສາມາດແຍກແລະດູດຊຶມ DNA genomic ຈາກ supernatant ແລະເນື້ອເຍື່ອ lysate, ງ່າຍດາຍແລະປະຫຍັດເວລາ;ຖັນ RNA ພຽງແຕ່ສາມາດປະສິດທິພາບການຜູກມັດ RNA ແລະສາມາດໄດ້ຮັບການປຸງແຕ່ງພ້ອມກັນດ້ວຍສູດທີ່ເປັນເອກະລັກຈໍານວນຫຼາຍຂອງຕົວຢ່າງ.
ລະບົບທັງຫມົດແມ່ນ RNase-Free, ດັ່ງນັ້ນ RNA ສະກັດບໍ່ໄດ້ຖືກທໍາລາຍ;Buffer RW1, Buffer RW2 buffer ລ້າງລະບົບ, ດັ່ງນັ້ນ RNA ທີ່ໄດ້ຮັບແມ່ນບໍ່ມີທາດໂປຼຕີນ, DNA, ion, ແລະມົນລະພິດປະສົມອິນຊີ.
ອົງປະກອບຊຸດ
| ຊຸດການແຍກ RNA ທັງໝົດຂອງສັດ | ||
| ອົງປະກອບຊຸດ | RE-03011 | RE-03014 |
| 50 ທ | 200 ທ | |
| Buffer RL1* | 25ml | 100ml |
| Buffer RL2 | 15ml | 60ml |
| Buffer RW1* | 25ml | 100ml |
| Buffer RW2 | 24ml | 96ml |
| RNase-Free ddH2O | 10ml | 40ml |
| ຖັນ RNA ເທົ່ານັ້ນ | 50 | 200 |
| ຖັນ DNA-ທໍາຄວາມສະອາດ | 50 | 200 |
| ຄູ່ມືການສອນ | 1 ຊິ້ນ | 1 ຊິ້ນ |
ຂໍ້ມູນຜະລິດຕະພັນ
| ຮູບແບບ | ຖັນ spin | ອົງປະກອບການຊໍາລະລ້າງ | ຖັນ foregene, reagent |
| ຟລັກ | 1-24 ຕົວຢ່າງ | ເວລາຕໍ່ການກະກຽມ | ~30 ນາທີ (24 ຕົວຢ່າງ) |
| Centrifuge | ຈຸດສູນກາງຂອງໂຕະ | ການແຍກ Pyrolysis | ການແຍກ centrifugal |
| ຕົວຢ່າງ | ເນື້ອເຍື່ອສັດ;ເຊລ | ຈໍານວນຕົວຢ່າງ | ເນື້ອເຍື່ອ: 10-20 ມກ;ຕາລາງ:(1-5)×106 |
| ປະລິມານ Elution | 50-200 ມລ | ປະລິມານການໂຫຼດສູງສຸດ | 850 ມລ |
ຄຸນນະສົມບັດແລະຂໍ້ດີ
■ບໍ່ຈໍາເປັນຕ້ອງກັງວົນກ່ຽວກັບການເຊື່ອມໂຊມຂອງ RNA;ລະບົບທັງຫມົດແມ່ນ RNase-Free
■ ເອົາຄໍລໍາທໍາຄວາມສະອາດ DNA ທີ່ໃຊ້ DNA ອອກຢ່າງມີປະສິດທິພາບ
■ ເອົາ DNA ອອກໄປໂດຍບໍ່ຕ້ອງເພີ່ມ DNA
■ ການດໍາເນີນງານງ່າຍດາຍ - ທັງຫມົດແມ່ນສໍາເລັດຢູ່ໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງ
■ ການດໍາເນີນງານໄວສາມາດສໍາເລັດໃນ 30 ນາທີ
■ ປອດໄພ-ບໍ່ຈຳເປັນຕ້ອງໃຊ້ສານຕ້ານອະນຸມູນອິດສະລະ
■ ຄວາມບໍລິສຸດສູງ -OD260/280≈1.8-2.1
ຄໍາຮ້ອງສະຫມັກຊຸດ
ມັນເຫມາະສົມສໍາລັບການສະກັດເອົາແລະການຊໍາລະລ້າງຂອງ RNA ທັງຫມົດຈາກຄວາມຫລາກຫລາຍຂອງເນື້ອເຍື່ອສັດສົດຫຼືແຊ່ແຂງຫຼືຈຸລັງວັດທະນະທໍາ.
ຕົວກໍານົດການຜະລິດຕະພັນ
■ ຄໍາຮ້ອງສະຫມັກລຸ່ມ: ການສັງເຄາະ cDNA ສາຍທໍາອິດ, RT-PCR, ການໂຄນໂມເລກຸນ, Northern Blot, ແລະອື່ນໆ.
■ ຕົວຢ່າງ: ເນື້ອເຍື່ອສັດ, ຈຸລັງລ້ຽງ
■ປະລິມານ: ເນື້ອເຍື່ອ 10-20mg, Cells(2-5)×106
■ ຄວາມອາດສາມາດຜູກມັດ DNA ສູງສຸດຂອງຖັນການບໍລິສຸດ: 80 μg
■ ປະລິມານ Elution: 50-200 μl
ແຜນວາດ
Animal Total RNA Isolation Kit ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວ 20mg
ຕົວຢ່າງຫນູສົດ, ເອົາ 5% ບໍລິສຸດ RNA 1% agar
Glycogel electrophoresis
1: Spleen 2: ຫມາກໄຂ່ຫຼັງ
3: ຕັບ 4: ຫົວໃຈ
ການເກັບຮັກສາແລະອາຍຸການເກັບຮັກສາ
ຊຸດສາມາດເກັບຮັກສາໄວ້ສໍາລັບ 24 ເດືອນໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງ (15-25 ℃) ຫຼື 2-8 ℃ສໍາລັບເວລາດົນກວ່າ.Buffer RL1 ສາມາດເກັບຮັກສາໄວ້ທີ່ 4 ℃ສໍາລັບ 1 ເດືອນຫຼັງຈາກເພີ່ມ β- mercaptoethanol (ທາງເລືອກ).
ອ້າງອີງບົດຄວາມ
1.ຖ້າ: 18.808:Zheng, Q., Qin, F., Luo, R., et al.mRNA-Loaded Lipid-like Nanoparticles ສໍາລັບການແກ້ໄຂພື້ນຖານຕັບໂດຍຜ່ານການເພີ່ມປະສິດທິພາບຂອງ Central Composite Design.Adv.ໜ້າທີ່.Mater.2021, 31, 2011068.doi:10.1002/adfm.202011068.
2.ຖ້າ: 18.187:He X, Hong W, Yang J, et al.apoptosis spontaneous ຂອງຈຸລັງໃນການກະກຽມຈຸລັງລໍາຕົ້ນການປິ່ນປົວ exert immunomodulatory ຜົນກະທົບໂດຍຜ່ານການປ່ອຍຂອງ phosphatidylserine.ການສົ່ງສັນຍານເປົ້າຫມາຍ Ther.2021 ກໍລະກົດ 14;6(1):270.doi: 10.1038/s41392-021-00688-z.
3.ຖ້າ: 17.97: Dai Z, Liu H, Liao J, et al.ການດັດແກ້ N7-Methylguanosine tRNA ປັບປຸງການແປ mRNA oncogenic ແລະສົ່ງເສີມການກ້າວຫນ້າຂອງໂຣກ cholangiocarcinoma intrahepatic.ໂມລເຊລ.2021 ກໍລະກົດ 29:S1097-2765(21)00555-4.doi: 10.1016/j.molcel.2021.07.003.
4.ຖ້າ: 9.225:Cao X, Shu Y, Chen Y, et al.ການດັດແກ້ Mettl14-Mediated m6A ອໍານວຍຄວາມສະດວກໃນການຟື້ນຟູຕັບໂດຍການຮັກສາ endoplasmic Reticulum Homeostasis.Cell Mol Gastroenterol Hepatol.2021;12(2):633-651.doi: 10.1016/j.jcmgh.2021.04.001.
ຊຸດ RNA isoaltion ສໍາລັບ ແຫຼ່ງຕົວຢ່າງອື່ນໆສາມາດໃຊ້ໄດ້:
ຈຸລັງ, ພືດ, ໄວຣັສ, ເລືອດ, ແລະອື່ນໆ.
RNA ບໍ່ໄດ້ຖືກສະກັດອອກຫຼື RNA ຜົນຜະລິດແມ່ນຕໍ່າ
ມີຫຼາຍປັດໃຈທີ່ມີຜົນກະທົບຕໍ່ປະສິດທິພາບການຟື້ນຕົວ, ເຊັ່ນ: ເນື້ອເຍື່ອຂອງ RNA ຕົວຢ່າງ, ວິທີການປະຕິບັດງານ, ປະລິມານ elution, ແລະອື່ນໆ.
1. ການອາບນ້ຳກ້ອນ ຫຼື ການສູນພັນແບບ cryogenic (4 °C) ໄດ້ຖືກປະຕິບັດໃນລະຫວ່າງການປະຕິບັດງານ.
ຄໍາແນະນໍາ: ປະຕິບັດໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງ (15-25 ° C) ຕະຫຼອດຂະບວນການທັງຫມົດ, ຫ້າມອາບນ້ໍາກ້ອນແລະ centrifuge ໃນອຸນຫະພູມຕ່ໍາ.
2. ການເກັບຮັກສາຕົວຢ່າງທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງຫຼືເວລາເກັບຕົວຢ່າງຫຼາຍເກີນໄປ.
ຄຳແນະນຳ: ເກັບຮັກສາຕົວຢ່າງໄວ້ທີ່ -80 °C ຫຼື ແຊ່ແຂງໃນທາດໄນໂຕຣເຈນຂອງແຫຼວ ແລະ ຫຼີກລ່ຽງການໃຊ້ການແຊ່ແຂງຊ້ຳໆ;ພະຍາຍາມໃຊ້ເນື້ອເຍື່ອສົດຫຼືຈຸລັງວັດທະນະທໍາສໍາລັບການສະກັດເອົາ RNA.
3. ຕົວຢ່າງ lysis ບໍ່ພຽງພໍ.
ຄໍາແນະນໍາ: ໃນເວລາທີ່ເຮັດໃຫ້ເນື້ອເຍື່ອ homogenizing, ໃຫ້ແນ່ໃຈວ່າເນື້ອເຍື່ອແມ່ນ homogenized ພຽງພໍແລະຈຸລັງຂອງຈຸລັງໄດ້ຖືກແບ່ງອອກຢ່າງພຽງພໍເພື່ອອະທິບາຍການປ່ອຍ RNA.
4. eluent ບໍ່ໄດ້ຖືກເພີ່ມຢ່າງຖືກຕ້ອງ.
ຄໍາແນະນໍາ: ຢືນຢັນວ່າ RNase-Free ddH2O ແມ່ນເພີ່ມ dropwise ກັບກາງຂອງເຍື່ອຄໍລໍາຊໍາລະລ້າງ.
5. ປະລິມານທີ່ຖືກຕ້ອງຂອງເອທານອນຢ່າງແທ້ຈິງບໍ່ໄດ້ຖືກເພີ່ມໃສ່ Buffer RL2 ຫຼື Buffer RW2.
ຄໍາແນະນໍາ: ປະຕິບັດຕາມຄໍາແນະນໍາ, ເພີ່ມປະລິມານທີ່ຖືກຕ້ອງຂອງເອທານອນຢ່າງແທ້ຈິງໃສ່ Buffer RL2 ແລະ Buffer RW2 ແລະປະສົມໃຫ້ດີກ່ອນທີ່ຈະໃຊ້ຊຸດ.
6. ປະລິມານຕົວຢ່າງຂອງຈຸລັງແມ່ນບໍ່ເຫມາະສົມ.
ຄໍາແນະນໍາ: ໃຊ້ເນື້ອເຍື່ອ 10-20 mg ຫຼື (1-5) × 106ຈຸລັງຕໍ່ 500 μl buffer RL1, ຍ້ອນວ່າການນໍາໃຊ້ເນື້ອເຍື່ອຫຼາຍເກີນໄປສາມາດເຮັດໃຫ້ການສະກັດເອົາ RNA ຫຼຸດລົງ.
7. ປະລິມານ elution ທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງ ຫຼື elution ບໍ່ຄົບຖ້ວນ.
ຄໍາແນະນໍາ: ປະລິມານ elution ຂອງຖັນ purification ແມ່ນ 50-200 μl;ຖ້າຜົນກະທົບຂອງ elution ບໍ່ເປັນທີ່ພໍໃຈ, ແນະນໍາໃຫ້ຂະຫຍາຍເວລາການຈັດວາງອຸນຫະພູມຫ້ອງຫຼັງຈາກເພີ່ມ RNase-Free ddH preheated.2O, ເຊັ່ນ: ສໍາລັບ 5-10 ນາທີ.
8.The ຖັນ purification ມີ ethanol residue ຫຼັງຈາກ Buffer RW2 ລ້າງ.
ຄໍາແນະນໍາ: ຖ້າມີສານຕົກຄ້າງຂອງເອທານອນຫຼັງຈາກການລ້າງ Buffer RW2, ທໍ່ເປົ່າ centrifugation ສໍາລັບ 1 ນາທີ, ເວລາສໍາລັບການປະຕິບັດງານຂອງທໍ່ເປົ່າສາມາດເພີ່ມຂຶ້ນເປັນ 2 ນາທີ, ຫຼືຖັນການຊໍາລະລ້າງສາມາດຖືກວາງໄວ້ທີ່ອຸນຫະພູມຫ້ອງເປັນເວລາ 5 ນາທີເພື່ອເອົາເອທານອນທີ່ຕົກຄ້າງອອກຢ່າງພຽງພໍ.
RNA ບໍລິສຸດຖືກທໍາລາຍ
ຄຸນນະພາບຂອງ RNA ບໍລິສຸດແມ່ນກ່ຽວຂ້ອງກັບປັດໃຈເຊັ່ນ: ການເກັບຮັກສາຕົວຢ່າງ, ການປົນເປື້ອນ RNase, ແລະການຫມູນໃຊ້, ແລະອື່ນໆ.
1. ຕົວຢ່າງຂອງເນື້ອເຍື່ອບໍ່ໄດ້ຖືກເກັບຮັກສາໄວ້ໃນເວລາ.
ຄໍາແນະນໍາ: ຖ້າຕົວຢ່າງເນື້ອເຍື່ອຫຼືຈຸລັງບໍ່ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ໃນລັກສະນະທີ່ທັນເວລາຫຼັງຈາກການລວບລວມ, ທັນທີເກັບຮັກສາໄວ້ cryopreserve ຢູ່ທີ່ -80 ° C ຫຼືໄນໂຕຣເຈນຂອງແຫຼວ.ເພື່ອສະກັດ RNA, ໃຫ້ໃຊ້ເນື້ອເຍື່ອ ຫຼືຈຸລັງທີ່ເອົາມາໃໝ່ທຸກຄັ້ງທີ່ເປັນໄປໄດ້.
2. ການແຊ່ແຂງຊ້ຳຄືນຂອງຕົວຢ່າງເນື້ອເຍື່ອ.
ຄໍາແນະນໍາ: ເມື່ອເກັບຕົວຢ່າງເນື້ອເຍື່ອ, ມັນດີທີ່ສຸດທີ່ຈະຕັດມັນອອກເປັນຕ່ອນນ້ອຍເພື່ອເກັບຮັກສາ, ແລະເອົາຫນຶ່ງຂອງຕ່ອນໃນເວລາທີ່ນໍາໃຊ້ພວກມັນເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການແຊ່ແຂງຊ້ໍາອີກຄັ້ງແລະການເຊື່ອມໂຊມຂອງ RNA.
3. RNase ແມ່ນແນະນໍາຫຼືບໍ່ໃສ່ຖົງມືທີ່ຖິ້ມແລ້ວ, ຫນ້າກາກ, ແລະອື່ນໆໃນລະຫວ່າງການປະຕິບັດງານ.
ຄໍາແນະນໍາ: ການທົດລອງການສະກັດເອົາ RNA ແມ່ນປະຕິບັດໄດ້ດີທີ່ສຸດໃນຫ້ອງການຈັດການ RNA ແຍກຕ່າງຫາກແລະຕາຕະລາງໄດ້ຖືກອະນາໄມກ່ອນການທົດລອງ.
ໃສ່ຖົງມື ແລະໜ້າກາກທີ່ໃຊ້ແລ້ວຖິ້ມໄດ້ໃນລະຫວ່າງການທົດລອງ ເພື່ອຫຼຸດຜ່ອນການເສື່ອມຂອງ RNA ທີ່ເກີດຈາກການນຳ RNase.
4. Reagents ແມ່ນປົນເປື້ອນດ້ວຍ RNase ໃນລະຫວ່າງການໃຊ້.
ຄຳແນະນຳ: ທົດແທນຊຸດການແຍກ RNA ທັງໝົດຂອງສັດໃໝ່ສຳລັບການທົດລອງທີ່ກ່ຽວຂ້ອງ.
5. ທໍ່ centrifuge, ຄໍາແນະນໍາ, ແລະອື່ນໆທີ່ໃຊ້ໃນການຫມູນໃຊ້ RNA ຖືກປົນເປື້ອນດ້ວຍ RNase.
ຄໍາແນະນໍາ: ຢືນຢັນວ່າທໍ່ centrifuge, ຄໍາແນະນໍາ, pipettes, ແລະອື່ນໆທີ່ໃຊ້ໃນການສະກັດເອົາ RNA ແມ່ນທັງຫມົດ RNase-Free.
RNA ທີ່ໄດ້ຮັບບໍລິສຸດມີຜົນກະທົບການທົດລອງລຸ່ມນ້ໍາ
RNA purified ໂດຍຖັນ purification, ຖ້າຫາກວ່າ ions ເກືອ, ເນື້ອໃນທາດໂປຼຕີນມີຂະຫນາດໃຫຍ່ເກີນໄປຈະສົ່ງຜົນກະທົບຕໍ່ການທົດລອງ downstream, ເຊັ່ນ: reverse transcription, Northern Blot et al.
1. RNA elutioned ມີສານຕົກຄ້າງ ion ເກືອ.
ຄໍາແນະນໍາ: ຢືນຢັນວ່າປະລິມານທີ່ຖືກຕ້ອງຂອງ ethanol ໄດ້ຖືກເພີ່ມໃສ່ Buffer RW2 ແລະປະຕິບັດການລ້າງຖັນ 2 purification ໃນຄວາມໄວ centrifugal ທີ່ຊີ້ໃຫ້ເຫັນສໍາລັບການດໍາເນີນງານ;ຖ້າມີ ion ເກືອຕົກຄ້າງ, ອອກຈາກຄໍລໍາການຊໍາລະລ້າງໃຫ້ Buffer RW2 ເປັນເວລາ 5 ນາທີຢູ່ທີ່ອຸນຫະພູມຫ້ອງແລະດໍາເນີນການ centrifugation ເພື່ອເພີ່ມການກໍາຈັດການປົນເປື້ອນຂອງເກືອ.
2. ສານຕົກຄ້າງຂອງເອທານອນໃນ elutioned RNA.
ຄໍາແນະນໍາ: ຢືນຢັນວ່າຫຼັງຈາກການລ້າງ buffer RW2, ດໍາເນີນການ centrifugation tube ເປົ່າໃນຄວາມໄວ centrifugation ຊີ້ບອກສໍາລັບການດໍາເນີນງານ, ເພີ່ມເວລາຂອງການດໍາເນີນງານ centrifugation ທໍ່ເປົ່າເປັນ 2 min ຖ້າຍັງມີ ethanol ຕົກຄ້າງ, ຫຼືປະໄວ້ຢູ່ທີ່ອຸນຫະພູມຫ້ອງສໍາລັບ 5 ນາທີຫຼັງຈາກທໍ່ເປົ່າເພື່ອ centrifugation reximethanol.
