(96-well) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR Kit – SYBR Green I
ລາຍລະອຽດ
ໄດ້(96-ດີ) QuickEasyTM ຊຸດ Cell Direct RT-qPCR–SYBR ສີຂຽວ Iສະຫນອງລະບົບ lysis buffer ເປັນເອກະລັກto ປ່ອຍ RNA ຢ່າງໄວວາຈາກຫ້ອງປູກຝັງຕົວຢ່າງສໍາລັບການຕິກິຣິຍາ RT-qPCR, ກໍາຈັດການໃຊ້ເວລາຫຼາຍແລະການອອກແຮງງານຫຼາຍຂະບວນການຊໍາລະລ້າງ RNA, ແລະໃຊ້ເວລາພຽງແຕ່ 7 ນາທີເພື່ອໃຫ້ໄດ້ແມ່ແບບ RNA ທີ່ຕ້ອງການ.ໄດ້5× Direct RT Mixແລະ2× ກົງ qPCR Mix-SYBRສະຫນອງໃຫ້ຢູ່ໃນປ່ອງໄດ້ຢ່າງວ່ອງໄວແລະໄດ້ຮັບປະລິມານທີ່ໃຊ້ເວລາທີ່ແທ້ຈິງປະສິດທິຜົນຜົນໄດ້ຮັບ PCR.
5× Direct RT Mix ແລະ 2× Direct qPCR Mix-SYBR ມີຄວາມທົນທານຕໍ່ inhibitor ທີ່ເຂັ້ມແຂງ, ແລະສາມາດນໍາໃຊ້ lysate ຂອງຕົວຢ່າງເພື່ອທົດສອບເປັນແມ່ແບບສໍາລັບການຖອດຂໍ້ຄວາມແບບປີ້ນກັບກັນທີ່ມີປະສິດທິພາບແລະການຂະຫຍາຍສະເພາະ.ທາດ reagent ມີ Foregene ເປັນເອກະລັກ Reverse Transcriptase ທີ່ມີຄວາມກ່ຽວຂ້ອງສູງສໍາລັບ RNA, ເຊັ່ນດຽວກັນກັບ Hot D-Taq DNA Polymerase , dNTPs, MgCl2 , ຕິກິຣິຍາ buffer , PCR optimizer ແລະ stabilizer , ແລະສາມາດໄດ້ຮັບການນໍາໃຊ້ຮ່ວມກັບ lysis buffer ກວດຫາຕົວຢ່າງໄດ້ໄວ, ໄດ້ຢ່າງງ່າຍດາຍແລະຖືກຕ້ອງ, ແລະມັນມີລັກສະນະຂອງຄວາມອ່ອນໄຫວສູງ, ສະເພາະທີ່ເຂັ້ມແຂງແລະຄວາມຫມັ້ນຄົງທີ່ດີ.
ຊຸດດັ່ງກ່າວແມ່ນແນໃສ່ lysis ລະບົບຈຸນລະພາກຂອງຈຸລັງວັດທະນະທໍາ 96 ດີ, ແລະມີຄວາມສອດຄ່ອງແລະຄວາມສອດຄ່ອງທີ່ດີ;ອົງປະກອບຂອງຊຸດໃຫ້ 96 ປະຕິກິລິຍາ lysis, 96 ປະຕິກິລິຍາ reverse transcription ແລະ 96 × 2 qPCR ປະຕິກິລິຍາ, ເຊິ່ງສາມາດຕອບສະຫນອງແຜ່ນຈຸລັງ 96-well ສໍາລັບການນໍາໃຊ້ຫນຶ່ງຄັ້ງ, ຫຼີກເວັ້ນການມົນລະພິດທີ່ເກີດຈາກການເປີດຊ້ໍາ, freezing ແລະ thawing ຂອງ reagents ແລະການເຊື່ອມໂຊມຂອງການປະຕິບັດ reagents.
ອົງປະກອບຊຸດ
| ອົງປະກອບຊຸດ ( 50 μລະບົບ L lysis/20 μLRT ລະບົບປະຕິກິລິຍາ / 20μລະບົບປະຕິກິລິຍາ L qPCR) | DRT-03011 | ຂໍ້ສັງເກດ | |
| 96 ທ | |||
| ສ່ວນI | ບັກCL | 5 ມລ | ເຊລລີຊິສ |
| ForegeneProtease Plus II | 100 μL | ||
| ບັກST | 500 μL | ||
| ສ່ວນ II | DNAຢາງລຶບ | 100 μL | |
| 5× Direct RT Mix | 400 μL | RT | |
| 2× ການປະສົມ qPCR ໂດຍກົງ-SYBR | 1 ມL × 2 | qPCR | |
| 50× ROX Reference Dye | 400µL | ||
| RNase- ຟຣີddH2 O | 1.7 ມລ |
| |
| Mປະຈຳປີ | 1 ສິ້ນ | 1 ໃຫ້ບໍລິການ | |
*: The lysis reagent DNA Eraser ແມ່ນລວມຢູ່ໃນພາກທີ II ຂອງຊຸດ;ອົງປະກອບຂອງ Cell Lysis, RT, ແລະ qPCR ສາມາດຊື້ໄດ້ແຍກຕ່າງຫາກ.
ຄຸນນະສົມບັດແລະຂໍ້ດີ
■ງ່າຍດາຍແລະປະສິດທິຜົນ: ດ້ວຍເຕັກໂນໂລຊີ Cell Direct RT, ຕົວຢ່າງ RNA ສາມາດໄດ້ຮັບໃນພຽງແຕ່ 7 ນາທີ.
■ ຄວາມຕ້ອງການຕົວຢ່າງມີຂະຫນາດນ້ອຍ, ຕ່ໍາສຸດ 10 ຈຸລັງສາມາດທົດສອບໄດ້.
■ ກະແສໄຟຟ້າສູງ: ມັນສາມາດກວດຫາ RNA ໄດ້ໄວໃນເຊລທີ່ລ້ຽງຢູ່ໃນແຜ່ນ 384, 96, 24, 12, 6 ດີ.
■ DNA Eraser ສາມາດເອົາ genomes ທີ່ປ່ອຍອອກມາໄດ້ຢ່າງໄວວາ, ຫຼຸດຜ່ອນຜົນກະທົບຢ່າງຫຼວງຫຼາຍຕໍ່ຜົນການທົດລອງຕໍ່ໄປ.
■ ລະບົບ RT ແລະ qPCR ທີ່ຖືກປັບປຸງໃຫ້ດີຂຶ້ນ ເຮັດໃຫ້ການຖອດຂໍ້ຄວາມແບບປີ້ນກັບ RT-PCR ສອງຂັ້ນຕອນມີປະສິດທິພາບ ແລະ PCR ມີຄວາມສະເພາະເຈາະຈົງ, ແລະທົນທານຕໍ່ກັບ RT-qPCR ປະຕິກິລິຍາ inhibitors.
ຄໍາຮ້ອງສະຫມັກຊຸດ
ຂອບເຂດການນຳໃຊ້: ເຊລທີ່ລ້ຽງ.
- RNA ປ່ອຍອອກມາໂດຍ lysis ຕົວຢ່າງ: ໃຊ້ໄດ້ກັບແມ່ແບບ RT-qPCR ຂອງຊຸດນີ້ເທົ່ານັ້ນ.
- ຊຸດສາມາດນໍາໃຊ້ໄດ້ສໍາລັບຈຸດປະສົງດັ່ງຕໍ່ໄປນີ້: ການວິເຄາະການສະແດງອອກຂອງເຊື້ອ, ການກວດສອບຜົນກະທົບຂອງ siRNA-mediated gene silencing, ການກວດສອບຢາເສບຕິດ, ແລະອື່ນໆ.
ການເກັບຮັກສາແລະອາຍຸການເກັບຮັກສາ
ສ່ວນ I ຂອງຊຸດນີ້ຄວນຈະຖືກເກັບໄວ້ຢູ່ທີ່ 4℃;ພາກທີ II ຄວນເກັບຮັກສາໄວ້ທີ່ -20 ℃.
Foregene Protease Plus II ຄວນຖືກເກັບໄວ້ຢູ່ທີ່ 4℃, ບໍ່ freeze ຢູ່ -20 ℃.
Reagent 2×qPCR Mix-Taqman ໂດຍກົງຄວນຖືກເກັບໄວ້ຢູ່ທີ່ -20℃ໃນຄວາມມືດ;ຖ້າໃຊ້ເລື້ອຍໆ, ມັນຍັງສາມາດເກັບຮັກສາໄວ້ຢູ່ທີ່ 4℃ ສໍາລັບການເກັບຮັກສາໄລຍະສັ້ນ (ໃຊ້ເຖິງພາຍໃນ 10 ມື້).
ຫຼັກການການອອກແບບ primer PCR ໃນເວລາຈິງ
Forward Primer ແລະ Reverse Primer
ສໍາລັບ PCR ທີ່ແທ້ຈິງ, ການອອກແບບ primer ແມ່ນມີຄວາມສໍາຄັນຫຼາຍ.Primers ແມ່ນກ່ຽວຂ້ອງກັບສະເພາະແລະປະສິດທິພາບຂອງການຂະຫຍາຍ PCR, ແລະສາມາດໄດ້ຮັບການອອກແບບໂດຍອ້າງອີງໃສ່ຫຼັກການດັ່ງຕໍ່ໄປນີ້:
- ຄວາມຍາວຂອງ primer: 18-30bp.
- ເນື້ອໃນ GC: 40-60%.
- ຄ່າ Tm: ຊອບແວອອກແບບ primer ເຊັ່ນ Primer 5 ສາມາດໃຫ້ຄ່າ Tm ຂອງ primer.ຄ່າ Tm ຂອງ primers ເທິງນ້ໍາແລະລຸ່ມຄວນຈະໃກ້ຊິດເທົ່າທີ່ເປັນໄປໄດ້.ສູດການຄິດໄລ່ Tm ຍັງສາມາດຖືກນໍາໃຊ້: Tm = 4 °C (G + C) + 2 ° C (A + T).ເມື່ອປະຕິບັດ PCR, ອຸນຫະພູມຕ່ໍາກວ່າຄ່າ primer Tm ຂອງ 5 ° C ໂດຍທົ່ວໄປແມ່ນເລືອກເປັນອຸນຫະພູມ annealing (ການເພີ່ມຂຶ້ນທີ່ສອດຄ້ອງກັນຂອງອຸນຫະພູມ annealing ສາມາດເພີ່ມຄວາມສະເພາະຂອງຕິກິຣິຍາ PCR).
- ຜະລິດຕະພັນ Primers ແລະ PCR:
- ການອອກແບບ primer PCR ຄວາມຍາວຜະລິດຕະພັນຂະຫຍາຍແມ່ນມັກ 100-150bp.
- ການອອກແບບ primers ໃນເຂດໂຄງສ້າງຮອງຂອງແມ່ແບບຄວນໄດ້ຮັບການຫຼີກເວັ້ນຫຼາຍເທົ່າທີ່ເປັນໄປໄດ້.
- ຫຼີກລ້ຽງການສ້າງຖານເສີມ 2 ຫຼືຫຼາຍກວ່າລະຫວ່າງ 3′ ປາຍຂອງ primers ເທິງນ້ໍາແລະລຸ່ມນ້ໍາ.
- Primer 3′ ຖານ terminal ບໍ່ສາມາດມີ 3 G ຫຼື C ຕິດຕໍ່ກັນເພີ່ມເຕີມ.
- primers ຕົວເອງບໍ່ສາມາດມີໂຄງສ້າງເສີມ, ຖ້າບໍ່ດັ່ງນັ້ນໂຄງສ້າງ hairpin ຈະຖືກສ້າງຕັ້ງຂຶ້ນ, ຜົນກະທົບຕໍ່ການຂະຫຍາຍ PCR.
- ATCG ຄວນແຈກຢາຍເທົ່າທີ່ເປັນໄປໄດ້ໃນລໍາດັບ primer, ແລະ 3′ terminal base ຄວນຖືກຫລີກລ້ຽງເປັນ T.
ເອກະສານຊ້ອນທ້າຍ1: ຄell DirectRT-qPCR ຊຸດສ່ວນປະກອບt ຊຸດເສີມ
1.Cell Lysis Solution
| ການແກ້ໄຂຈຸລັງ Lysis | |||
| ອົງປະກອບຊຸດ (ລະບົບ lysis 24 ດີ / ດີ) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 ທ | 500 ທ | ||
| ສ່ວນI | Buffer CL | 20 ມລ | 100 ມລ |
| Foregene Protease Plus II | 400 ມລ | 1 ມລ × 2 | |
| Buffer ST | 1 ມລ × 2 | 10 ມລ | |
| ສ່ວນII | DNA Eraser | 400 ມລ | 1 ມລ × 2 |
| RT Mix | |
| ອົງປະກອບຊຸດ (ລະບົບປະຕິກິລິຍາ 20 μl) | DRT-01011-B1 |
| 200 ທ | |
| 5× Direct RT Mix | 800 ມລ |
| RNase-Free ddH2O | 1.7 ມລ × 2 |
| qPCR ປະສົມ | ||
| ອົງປະກອບຊຸດ (ລະບົບປະຕິກິລິຍາ 20 μl) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 ທ | 1000 ທ | |
| 2× ກົງ qPCR Mix-Taqman | 1 ມລ × 2 | 1.7 ມລ × 6 |
| 20× ROX Reference Dye | 40 ມລ | 200 ມລ |
| RNase-Free ddH2O | 1.7 ມລ | 10 ມລ |
ຄູ່ມືການສອນ:
