ອັດຕາສ່ວນຕໍ່າຂອງ A260/A230 ມັກຈະເກີດຈາກຄວາມບໍ່ສະອາດທີ່ມີຄວາມຍາວຄື້ນການດູດຊຶມສູງສຸດຢູ່ທີ່ 230nm.ມາເບິ່ງສິ່ງທີ່ບໍ່ສະອາດເຫຼົ່ານີ້ປະກອບມີ:

• ມົນລະພິດທົ່ວໄປ	ຄວາມຍາວຄື້ນການດູດຊຶມ	ຜົນ​ກະ​ທົບ​ອັດ​ຕາ​ສ່ວນ​
  ໂປຣ​ຕີນ	~ 230nm ແລະ 280nm	ການຫຼຸດລົງພ້ອມກັນຂອງ A260/A 280ແລະ A260/A 280ອັດຕາສ່ວນ
  ເກືອ Guanidine	220-240 nm	ຫຼຸດ​ຜ່ອນ A260/A 280ອັດຕາສ່ວນ
  ຟີນອລ	~270nm	-
  Trizol	~ 230nm ແລະ 270nm	ຫຼຸດ​ຜ່ອນ A260/A 280ອັດຕາສ່ວນ
  EDTA	~230nm	ຫຼຸດ​ຜ່ອນ A260/A 280ອັດຕາສ່ວນ
  ເອທານອນ	230-240 nm	ຫຼຸດ​ຜ່ອນ A260/A 280ອັດຕາສ່ວນ

 
 
 
ຄວາມຍາວຄື້ນການດູດຊຶມ ແລະຄ່າກົງກັນຂ້າມຂອງມົນລະພິດທົ່ວໄປ

Pການປົນເປື້ອນ rotein
ມົນລະພິດຂອງທາດໂປຼຕີນສາມາດຖືວ່າເປັນມົນລະພິດທົ່ວໄປທີ່ສຸດໃນຂະບວນການສະກັດເອົາອາຊິດ nucleic.ທາດໂປຼຕີນມີຢູ່ລະຫວ່າງໄລຍະນ້ໍາເທິງແລະຕ່ໍາອິນຊີໄລຍະ.ມົນລະພິດຈະຫຼຸດລົງອັດຕາສ່ວນຂອງ A260 / A280 ແລະ A260 / A230 ໃນເວລາດຽວກັນ, ແລະອັດຕາສ່ວນຂອງ A260 / A230 ຈະມີການປ່ຽນແປງຫຼາຍກວ່າອັດຕາສ່ວນຂອງ A260 / A280.
ໃນໄລຍະຕໍ່ມາreverse transcriptionor ປະຕິກິລິຍາ qPCR, ທາດໂປຼຕີນທີ່ຕົກຄ້າງສາມາດຍັບຍັ້ງຫຼືແຊກແຊງການເຮັດວຽກຂອງ enzyme.ວິທີທີ່ດີທີ່ສຸດເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການປົນເປື້ອນທາດໂປຼຕີນແມ່ນການຈື່ຈໍາຫຼັກການຂອງ "ແທນທີ່ຈະຫນ້ອຍກ່ວາຫຼາຍ, ຈໍານວນຂະຫນາດນ້ອຍຫຼາຍເທື່ອ" ໃນເວລາທີ່ aspiring supernatant ໄດ້.

2. ມົນລະພິດ Guanidinium
hydrochloride (GuHCl) ແລະ guanidine thiocyanate (GTC) ມີຜົນກະທົບຂອງທາດໂປຼຕີນຈາກ denaturing, ເຊິ່ງສາມາດທໍາລາຍເຍື່ອເຊນໄດ້ໄວໃນລະຫວ່າງຂະບວນການສະກັດເອົາອາຊິດນິວຄລີອິກ, ເຮັດໃຫ້ໂປຣຕີນ denaturation ແລະ precipitation.ຄວາມຍາວຄື້ນການດູດຊຶມຂອງ GuHCl ແລະ GTC ແມ່ນຢູ່ລະຫວ່າງ 220-240 nm, ແລະເກືອ guanidinium ທີ່ເຫຼືອຈະຫຼຸດອັດຕາສ່ວນ A260/A230.ເຖິງແມ່ນວ່າເກືອ guanidinium ທີ່ເຫຼືອຈະຫຼຸດລົງອັດຕາສ່ວນ,ຜົນ​ກະ​ທົບ​ຕໍ່​ການ​ທົດ​ລອງ​ຢູ່​ລຸ່ມ​ນ​້​ໍ​າ​ແມ່ນ​ແທ້​ຈິງ​ແລ້ວ​ລະ​ເລີຍ​.

3. ການປົນເປື້ອນ Trizol
ອົງປະກອບຕົ້ນຕໍຂອງ Trizol ແມ່ນ phenol.ຫນ້າທີ່ຕົ້ນຕໍຂອງ phenol ແມ່ນເພື່ອ lyse ຈຸລັງແລະປ່ອຍທາດໂປຼຕີນແລະສານອາຊິດ nucleic ໃນຈຸລັງ.ເຖິງແມ່ນວ່າ phenol ສາມາດ denature ທາດໂປຼຕີນຢ່າງມີປະສິດທິຜົນ, ມັນບໍ່ສາມາດຍັບຍັ້ງກິດຈະກໍາ RNase ໄດ້ຢ່າງສົມບູນ.ດັ່ງນັ້ນ, 8-hydroxyquinoline , guanidine isothiocyanate , β-mercaptoethanol , ແລະອື່ນໆແມ່ນຖືກເພີ່ມໃສ່ TRIzol ເພື່ອຍັບຍັ້ງ RNase endogenous ແລະ exogenous.
ເມື່ອສະກັດ RNA ຈຸລັງ, Trizol ສາມາດ lyse ຈຸລັງຢ່າງໄວວາແລະຍັບຍັ້ງ nuclease ທີ່ປ່ອຍອອກມາຈາກຈຸລັງ, ແລະ Trizol ທີ່ຕົກຄ້າງຈະຫຼຸດລົງຢ່າງຫຼວງຫຼາຍອັດຕາສ່ວນຂອງ A260 / A230.
ວິທີການປຸງແຕ່ງ: ໃນເວລາທີ່ centrifuging, ມັນຕ້ອງໄດ້ຮັບການສັງເກດເຫັນວ່າ phenol ໃນ Trizol ແມ່ນລະລາຍໄດ້ຢ່າງງ່າຍດາຍໃນໄລຍະນ້ໍາພາຍໃຕ້ສະພາບຂອງ 4 °ແລະອຸນຫະພູມຫ້ອງ.

4. ຕົກຄ້າງເອທານອນ
ເອທານອນຖືກນໍາໃຊ້ໃນຂະບວນການສຸດທ້າຍເພື່ອ precipitate DNA ໃນຂະນະທີ່ລະລາຍ ions ເກືອທີ່ອາດຈະຖືກຜູກມັດກັບ DNA.ຄວາມຍາວຂອງຄື້ນການດູດຊຶມສູງສຸດການດູດຊຶມສູງສຸດຂອງເອທານອນຍັງຢູ່ທີ່ 230-240 nm, ເຊິ່ງຍັງຈະຫຼຸດອັດຕາສ່ວນ A260/A230.
ວິທີການຫຼີກລ້ຽງການຕົກຄ້າງຂອງເອທານອນສາມາດເຮັດຊ້ໍາອີກສອງຄັ້ງໃນລະຫວ່າງການ elution ສຸດທ້າຍ, ຟັນໃນ.hood fumeສໍາລັບສອງນາທີເພື່ອໃຫ້ເອທານອນລະເຫີຍຢ່າງເຕັມສ່ວນກ່ອນທີ່ຈະເພີ່ມ buffer ສໍາລັບ elution.
ຢ່າງໃດກໍ່ຕາມ, ມັນຄວນຈະຮູ້ວ່າອັດຕາສ່ວນແມ່ນພຽງແຕ່ດັດຊະນີການປະເມີນຜົນຂອງຄຸນນະພາບ RNA ເທົ່ານັ້ນ.ຖ້າການປະຕິບັດງານທີ່ໄດ້ກ່າວມາຂ້າງເທິງນີ້ຖືກຄວບຄຸມຢ່າງເຂັ້ມງວດ, ການບ່ຽງເບນລະຫວ່າງອັດຕາສ່ວນແລະລະດັບມາດຕະຖານຈະບໍ່ມີຜົນກະທົບຢ່າງຫຼວງຫຼາຍຕໍ່ການທົດລອງທາງລຸ່ມ.
ຜະ​ລິດ​ຕະ​ພັນ​ທີ່​ກ່ຽວ​ຂ້ອງ:
ຊຸດການແຍກ RNA ທັງໝົດຂອງສັດ
Plant Total ຊຸດ RNA Isolation
ຊຸດ Cell Total RNA Isolation
Plant Total RNA Isolation Kit Plus