ການຂ້າເຊື້ອຂອງຄໍາແນະນໍາ pipette ແລະທໍ່ EP, ແລະອື່ນໆ.

1. ກະກຽມ 0.1% (ຫນຶ່ງພັນ) DEPC (ສານພິດສູງ) ດ້ວຍນ້ໍາ deionized, ໃຊ້ມັນຢ່າງລະມັດລະວັງໃນ hood fume, ແລະເກັບຮັກສາມັນຢູ່ທີ່ 4 ° C ຫ່າງຈາກແສງສະຫວ່າງ;

ນ້ໍາ DEPC ແມ່ນນ້ໍາບໍລິສຸດທີ່ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍ DEPC ແລະຂ້າເຊື້ອໂດຍອຸນຫະພູມສູງແລະຄວາມດັນສູງ.ທົດສອບວ່າບໍ່ມີ RNase, DNase ແລະທາດໂປຼຕີນ.

2. ເອົາປາຍທໍ່ທໍ່ແລະທໍ່ EP ເຂົ້າໄປໃນ 0.1% DEPC, ແລະໃຫ້ແນ່ໃຈວ່າປາຍທໍ່ທໍ່ແລະທໍ່ EP ເຕັມໄປດ້ວຍ 0.1% DEP.

3. ປ້ອງກັນແສງ, ໃຫ້ຢືນ, ຄ້າງຄືນ (12-24 ຊົ່ວໂມງ)

4. ກ່ອງທີ່ມີປາຍແລະທໍ່ EP ບໍ່ຈໍາເປັນຕ້ອງຖືກແຊ່ນ້ໍາ DEPC.ຫລັງຈາກເອົານ້ຳ DEPC ອອກຈາກທໍ່ປາຍ ຫຼືທໍ່ EP ປະມານແລ້ວ, ຫໍ່ມັນຂຶ້ນແລ້ວຫໍ່ມັນ.

5. 121 ອົງສາເຊ, 30 ນາທີ

6. 180 ອົງສາເຊ, ແຫ້ງເປັນເວລາຫຼາຍຊົ່ວໂມງ (ຢ່າງຫນ້ອຍ 3 ຊົ່ວໂມງ)

ໝາຍເຫດ: ກ.ໃສ່ຖົງມືຢາງ ແລະໜ້າກາກເມື່ອຈັດການກັບ DEPC!b, ຫຼືບໍ່ມີການຂ້າເຊື້ອ DEPC, 130 ℃, 90min autoclave (ຫ້ອງທົດລອງຈໍານວນຫຼາຍການຂ້າເຊື້ອອຸນຫະພູມສູງສອງຄັ້ງ)

ການພິຈາລະນາການສະກັດເອົາ RNA

ສອງປະກົດການທີ່ສໍາຄັນຂອງຄວາມລົ້ມເຫຼວຂອງການແຍກຈຸລັງ RNA

ການເຊື່ອມໂຊມຂອງ RNA ແລະການຕົກຄ້າງຂອງ impurities ໃນເນື້ອເຍື່ອ,ກ່ຽວກັບການຍ່ອຍສະຫຼາຍ, ທໍາອິດໃຫ້ເບິ່ງວ່າເປັນຫຍັງ RNA ທີ່ສະກັດຈາກຈຸລັງວັດທະນະທໍາບໍ່ຖືກທໍາລາຍໄດ້ງ່າຍ.ສານສະກັດຈາກ RNA ທີ່ມີຢູ່ທັງໝົດມີສ່ວນປະກອບທີ່ຍັບຍັ້ງ RNase ຢ່າງໄວວາ.ເພີ່ມ lysate ເຂົ້າໄປໃນຈຸລັງທີ່ລ້ຽງ, ແລະພຽງແຕ່ປະສົມມັນ, ຈຸລັງທັງຫມົດສາມາດໄດ້ຮັບການປະສົມຢ່າງລະອຽດກັບ lysate, ແລະຈຸລັງໄດ້ຖືກ lysed ຫມົດ.ຫຼັງຈາກຈຸລັງຖືກ lysed, ສ່ວນປະກອບຢ່າງຫ້າວຫັນໃນ lysate ທັນທີ inhibit RNase intracellular, ດັ່ງນັ້ນ RNA ຍັງຄົງຢູ່.ນັ້ນແມ່ນ, ຍ້ອນວ່າຈຸລັງທີ່ປູກຝັງແມ່ນຕິດຕໍ່ໄດ້ງ່າຍແລະຢ່າງເຕັມສ່ວນກັບ lysate, RNA ຂອງພວກມັນບໍ່ຖືກທໍາລາຍໄດ້ງ່າຍ;ໃນທາງກົງກັນຂ້າມ, RNA ໃນເນື້ອເຍື່ອຖືກທໍາລາຍໄດ້ງ່າຍເພາະວ່າຈຸລັງໃນເນື້ອເຍື່ອບໍ່ງ່າຍທີ່ຈະຕິດຕໍ່ກັບ lysate ໄດ້ໄວ.ເນື່ອງຈາກການຕິດຕໍ່ພຽງພໍ.ດັ່ງນັ້ນ,ສົມມຸດວ່າມີວິທີການປ່ຽນເນື້ອເຍື່ອເປັນຈຸລັງດຽວໃນຂະນະທີ່ຂັດຂວາງກິດຈະກໍາ RNA, ບັນຫາການເຊື່ອມໂຊມສາມາດແກ້ໄຂໄດ້ຢ່າງສົມບູນ.

ເຄື່ອງຈັກໄນໂຕຣເຈນຂອງແຫຼວແມ່ນວິທີການດັ່ງກ່າວທີ່ມີປະສິດທິພາບທີ່ສຸດ.ຢ່າງໃດກໍ່ຕາມ, ວິທີການຂັດໄນໂຕຣເຈນຂອງແຫຼວແມ່ນມີບັນຫາຫຼາຍ, ໂດຍສະເພາະໃນເວລາທີ່ຈໍານວນຕົວຢ່າງມີຂະຫນາດໃຫຍ່.ນີ້ເຮັດໃຫ້ສິ່ງທີ່ດີທີ່ສຸດຕໍ່ໄປ: homogenizer.ໄດ້ເຄື່ອງປະສົມວິທີການບໍ່ໄດ້ພິຈາລະນາຄໍາຖາມຂອງວິທີການກິດຈະກໍາ RNase ຖືກຍັບຍັ້ງກ່ອນທີ່ຈຸລັງຈະຖືກຕິດຕໍ່ກັບ lysate, ແຕ່ແທນທີ່ຈະອະທິຖານວ່າອັດຕາການລົບກວນຂອງເນື້ອເຍື່ອແມ່ນໄວກວ່າອັດຕາທີ່ RNase intracellular degrades RN.

ຜົນກະທົບຂອງ homogenizer ໄຟຟ້າແມ່ນດີກວ່າ,ແລະຜົນກະທົບຂອງ homogenizer ແກ້ວແມ່ນບໍ່ດີ, ແຕ່ໂດຍທົ່ວໄປ, ວິທີການ homogenizer ບໍ່ສາມາດປ້ອງກັນປະກົດການເຊື່ອມໂຊມໄດ້.ດັ່ງນັ້ນ, ຖ້າຫາກວ່າການສະກັດເອົາໄດ້ຖືກຊຸດໂຊມ, ເຄື່ອງ homogenizer ໄຟຟ້າຕົ້ນສະບັບຄວນຈະຖືກນໍາໃຊ້ສໍາລັບການ grinding ກັບໄນໂຕຣເຈນຂອງແຫຼວ;ເຄື່ອງ homogenizer ແກ້ວຕົ້ນສະບັບຄວນໄດ້ຮັບການປ່ຽນເປັນ homogenizer ໄຟຟ້າຫຼື milled ໂດຍກົງດ້ວຍໄນໂຕຣເຈນຂອງແຫຼວ.ບັນຫາແມ່ນເປັນໄປໄດ້ເກືອບ 100%.ໄດ້ຮັບການແກ້ໄຂ.

ບັນຫາການຕົກຄ້າງ impurity ຜົນກະທົບຕໍ່ການທົດລອງຕໍ່ໄປມີສາເຫດທີ່ຫຼາກຫຼາຍຫຼາຍກ່ວາການເຊື່ອມໂຊມ, ແລະວິທີແກ້ໄຂແມ່ນແຕກຕ່າງກັນ.ສະຫຼຸບແລ້ວ,ຖ້າມີການເຊື່ອມໂຊມຫຼືສິ່ງເສດເຫຼືອທີ່ຕົກຄ້າງຢູ່ໃນເນື້ອເຍື່ອ, ວິທີການສະກັດເອົາ / ທາດປະສົມສໍາລັບອຸປະກອນການທົດລອງສະເພາະຕ້ອງໄດ້ຮັບການເພີ່ມປະສິດທິພາບ.ທ່ານບໍ່ຈໍາເປັນຕ້ອງໃຊ້ຕົວຢ່າງທີ່ມີຄ່າຂອງທ່ານສໍາລັບການເພີ່ມປະສິດທິພາບ: ທ່ານສາມາດຊື້ສັດຂະຫນາດນ້ອຍເຊັ່ນປາ / ໄກ່ຈາກຕະຫຼາດ, ເອົາສ່ວນທີ່ສອດຄ້ອງກັນຂອງວັດສະດຸສໍາລັບການສະກັດເອົາ RNA, ແລະສ່ວນອື່ນໆສໍາລັບການສະກັດທາດໂປຼຕີນ - grind ດ້ວຍປາກ, ກະເພາະອາຫານແລະລໍາໄສ້ສະກັດ.

RNA ເປົ້າຫມາຍຂອງ RNA ທີ່ສະກັດໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ສໍາລັບການທົດລອງການຕິດຕາມທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ແລະຄວາມຕ້ອງການດ້ານຄຸນນະພາບຂອງມັນແມ່ນແຕກຕ່າງກັນ

ການກໍ່ສ້າງຫ້ອງສະຫມຸດ cDNA ຮຽກຮ້ອງໃຫ້ມີຄວາມສົມບູນຂອງ RNA ໂດຍບໍ່ມີການຕົກຄ້າງຂອງ inhibitors ຕິກິຣິຍາ enzyme;Northern ຮຽກຮ້ອງໃຫ້ມີຄວາມສົມບູນຂອງ RNA ທີ່ສູງຂຶ້ນແລະຄວາມຕ້ອງການຕ່ໍາສໍາລັບ residues inhibitors ຕິກິຣິຍາ enzyme;RT-PCR ບໍ່ຕ້ອງການຄວາມສົມບູນຂອງ RNA ສູງເກີນໄປ,ແຕ່ inhibits ປະຕິກິລິຍາ enzyme.ຂໍ້ກໍານົດການຕົກຄ້າງແມ່ນເຄັ່ງຄັດ.ການປ້ອນຂໍ້ມູນກໍານົດຜົນຜະລິດ;ທຸກໆຄັ້ງທີ່ເປົ້າຫມາຍແມ່ນເພື່ອໄດ້ຮັບ RNA ທີ່ມີຄວາມບໍລິສຸດສູງສຸດ, ມັນຈະມີລາຄາຖືກປະຊາຊົນແລະເງິນ.

ການເກັບຕົວຢ່າງ / ການເກັບຮັກສາ

ປັດໄຈທີ່ສົ່ງຜົນກະທົບຕໍ່ການເຊື່ອມໂຊມ ຫຼັງຈາກຕົວຢ່າງອອກຈາກຮ່າງກາຍທີ່ມີຊີວິດຢູ່ / ຫຼືສະພາບແວດລ້ອມການຂະຫຍາຍຕົວເດີມ, enzymes endogenous ໃນຕົວຢ່າງຈະເລີ່ມ degrade RNA,ແລະອັດຕາການເຊື່ອມໂຊມແມ່ນກ່ຽວຂ້ອງກັບເນື້ອໃນຂອງ enzymes endogenous ແລະອຸນຫະພູມ.ຕາມປະເພນີ, ມີພຽງແຕ່ສອງວິທີທີ່ຈະຍັບຍັ້ງກິດຈະກໍາຂອງ enzyme endogenous: ເພີ່ມ lysate ທັນທີແລະ homogenize ຢ່າງລະອຽດແລະໄວ;ຕັດເປັນຕ່ອນຂະຫນາດນ້ອຍແລະທັນທີ freeze ໃນໄນໂຕຣເຈນຂອງແຫຼວ.ທັງສອງວິທີການຮຽກຮ້ອງໃຫ້ມີການດໍາເນີນງານໄວ.ອັນສຸດທ້າຍແມ່ນເຫມາະສົມສໍາລັບຕົວຢ່າງທັງຫມົດ, ໃນຂະນະທີ່ອະດີດແມ່ນພຽງແຕ່ເຫມາະສົມສໍາລັບເນື້ອເຍື່ອທີ່ມີເນື້ອໃນຕ່ໍາຂອງຈຸລັງແລະ enzymes endogenous ແລະງ່າຍຕໍ່ການ homogenize.ໂດຍສະເພາະ, ເນື້ອເຍື່ອພືດ, ຕັບ, thymus, pancreas, spleen, ສະຫມອງ, ໄຂມັນ, ເນື້ອເຍື່ອກ້າມເນື້ອ, ແລະອື່ນໆແມ່ນ frozen ທີ່ດີທີ່ສຸດດ້ວຍໄນໂຕຣເຈນຂອງແຫຼວກ່ອນທີ່ຈະດໍາເນີນການ.

Fragmentation ແລະ homogenization ຂອງຕົວຢ່າງ

ປັດ​ໄຈ​ທີ່​ມີ​ຜົນ​ກະ​ທົບ​ການ​ເຊື່ອມ​ໂຊມ​ແລະ​ຜົນ​ຜະ​ລິດ fragmentation ຕົວ​ຢ່າງ​ແມ່ນ​ສໍາລັບການ homogenization ຢ່າງລະອຽດ, ເຊິ່ງແມ່ນສໍາລັບການປ່ອຍ RNA ຢ່າງສົມບູນແລະສົມບູນ.ຈຸລັງສາມາດຖືກແຍກເປັນເນື້ອດຽວກັນໂດຍກົງໂດຍບໍ່ໄດ້ແຕກ.ເນື້ອເຍື່ອສາມາດເປັນ homogenized ພຽງແຕ່ຫຼັງຈາກແຕກ.ເຊື້ອລາແລະເຊື້ອແບັກທີເຣັຍຈໍາເປັນຕ້ອງຖືກແຍກອອກດ້ວຍ enzymes ທີ່ສອດຄ້ອງກັນກ່ອນທີ່ພວກມັນຈະສາມາດເປັນ homogenized.ເນື້ອເຍື່ອທີ່ມີເນື້ອໃນ enzyme endogenous ຕ່ໍາແລະ homogenization ງ່າຍຂຶ້ນສາມາດໄດ້ຮັບການ crushed ແລະ homogenized ໃນເວລາດຽວໃນ lysate ໂດຍ homogenizer ເປັນ;ເນື້ອເຍື່ອພືດ, ຕັບ, thymus, pancreas, spleen, ສະຫມອງ, ໄຂມັນ, ເນື້ອເຍື່ອກ້າມເນື້ອແລະຕົວຢ່າງອື່ນໆ, ພວກມັນມີ enzymes endogenous ສູງຫຼືບໍ່ຖືກເຮັດໃຫ້ເປັນເນື້ອດຽວກັນ.ດັ່ງນັ້ນການລົບກວນຂອງເນື້ອເຍື່ອແລະ homogenization ຕ້ອງໄດ້ຮັບການປະຕິບັດແຍກຕ່າງຫາກ.ວິ​ທີ​ການ​ແຕກ​ແຍກ​ທີ່​ເຊື່ອ​ຖື​ໄດ້​ທີ່​ສຸດ​ແລະ​ຜະ​ລິດ​ຕະ​ພັນ​ຫຼາຍ​ທີ່​ສຸດ​ແມ່ນ​ການ​ຜະ​ລິດ​ດ້ວຍ​ໄນ​ໂຕຣ​ເຈນ​ໄວ້​ເປັນ​ຂອງ​ແຫຼວ​, ແລະ​ວິ​ທີ​ການ​ທີ່​ເຊື່ອ​ຖື​ໄດ້​ທີ່​ສຸດ​ຂອງ​ການ​ເຮັດ​ໃຫ້​ເປັນ​ເອ​ກະ​ສານ​ແມ່ນ​ການ​ນໍາ​ໃຊ້​ຂອງ homogenizer ໄຟ​ຟ້າ​.ຂໍ້ສັງເກດພິເສດກ່ຽວກັບການ milling ທີ່ມີໄນໂຕຣເຈນຂອງແຫຼວ: ຕົວຢ່າງຈະຕ້ອງບໍ່ຖືກ thawed ໃນລະຫວ່າງການຂະບວນການສີທັງຫມົດ, ເນື່ອງຈາກວ່າ enzymes endogenous ມັກຈະເຮັດວຽກໃນເວລາທີ່ frozen.

ທາງເລືອກຂອງ lysate

ຜົນກະທົບຕໍ່ຄວາມສະດວກສະບາຍຂອງການດໍາເນີນງານແລະປັດໃຈຂອງ impurities endogenous ທີ່ຕົກຄ້າງ ການແກ້ໄຂ lysis ທີ່ໃຊ້ທົ່ວໄປເກືອບສາມາດຍັບຍັ້ງກິດຈະກໍາຂອງ RNase.ດັ່ງນັ້ນ, ຈຸດສໍາຄັນຂອງການເລືອກການແກ້ໄຂ lysis ແມ່ນເພື່ອພິຈາລະນາປະສົມປະສານກັບວິທີການເຮັດຄວາມສະອາດ.ມີຂໍ້ຍົກເວັ້ນຫນຶ່ງ:ຕົວຢ່າງທີ່ມີເນື້ອໃນ enzyme endogenous ສູງແມ່ນແນະນໍາໃຫ້ໃຊ້ lysate ທີ່ມີ phenol ເພື່ອເພີ່ມຄວາມສາມາດໃນການກະຕຸ້ນ enzymes endogenous.

ທາງ​ເລືອກ​ຂອງ​ວິ​ທີ​ການ​ບໍ​ລິ​ສຸດ​

ປັດໄຈທີ່ມີຜົນກະທົບ impurities endogenous residual, ຄວາມໄວການສະກັດເອົາສໍາລັບຕົວຢ່າງທີ່ສະອາດເຊັ່ນຈຸລັງ, ຜົນໄດ້ຮັບທີ່ຫນ້າພໍໃຈສາມາດໄດ້ຮັບດ້ວຍເກືອບທຸກວິທີການ purification ຢູ່ໃນມື.ແຕ່ສໍາລັບຕົວຢ່າງອື່ນໆຈໍານວນຫຼາຍ, ໂດຍສະເພາະແມ່ນຜູ້ທີ່ມີລະດັບ impurities ສູງເຊັ່ນ: ພືດ, ຕັບ, ເຊື້ອແບັກທີເຣັຍ, ແລະອື່ນໆ, ການເລືອກວິທີການ purification ທີ່ເຫມາະສົມແມ່ນສໍາຄັນ.ວິທີການເຮັດຄວາມສະອາດ centrifugal ຖັນມີຄວາມໄວໃນການສະກັດເອົາຢ່າງລວດໄວແລະສາມາດກໍາຈັດສິ່ງເສດເຫຼືອທີ່ມີຜົນກະທົບຕໍ່ປະຕິກິລິຍາ enzymatic ຕໍ່ໄປຂອງ RNA, ແຕ່ມັນມີລາຄາແພງ (Foregene ສາມາດສະເຫນີຊຸດທີ່ມີປະສິດທິພາບ, ລາຍລະອຽດເພີ່ມເຕີມຄລິກທີ່ນີ້);ການນໍາໃຊ້ວິທີການຊໍາລະລ້າງແບບປະຫຍັດແລະຄລາສສິກ, ເຊັ່ນ: ຝົນ LiCl, ຍັງສາມາດໄດ້ຮັບຜົນໄດ້ຮັບທີ່ຫນ້າພໍໃຈ, ແຕ່ເວລາປະຕິບັດງານແມ່ນຍາວນານ..

"ສາມວິໄນແລະແປດເອົາໃຈໃສ່" ສໍາລັບການສະກັດ RNA

ລະບຽບວິໄນ 1:ຢຸດຕິການປົນເປື້ອນຂອງ enzymes exogenous.

ໝາຍເຫດ 1:ໃສ່ໜ້າກາກ ແລະ ຖົງມືຢ່າງເຂັ້ມງວດ.

ໝາຍເຫດ 2:ທໍ່ centrifuge, ຫົວ Tip, rods pipette, tank electrophoresis, ແລະ benches ທົດລອງທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບການທົດລອງຄວນໄດ້ຮັບການກໍາຈັດຢ່າງລະອຽດ.

ໝາຍເຫດ 3:ທາດປະຕິສັງຂອນ / ວິທີແກ້ໄຂທີ່ມີສ່ວນຮ່ວມໃນການທົດລອງ, ໂດຍສະເພາະນ້ໍາ, ຈະຕ້ອງບໍ່ມີ RNase.

ລະບຽບວິໄນ 2:ຂັດຂວາງກິດຈະກໍາຂອງ enzymes endogenous

ໝາຍເຫດ 4:ເລືອກວິທີການ homogenization ທີ່ເຫມາະສົມ.

ໝາຍເຫດ 5:ເລືອກ lysate ທີ່ເຫມາະສົມ.

ໝາຍເຫດ 6:ຄວບຄຸມປະລິມານເລີ່ມຕົ້ນຂອງຕົວຢ່າງ.

ລະບຽບວິໄນ 3:ຊີ້ແຈງຈຸດປະສົງການສະກັດເອົາຂອງທ່ານ

ໝາຍເຫດ 7:ດ້ວຍລະບົບ lysate ໃດໆທີ່ເຂົ້າຫາປະລິມານຕົວຢ່າງສູງສຸດ, ອັດຕາຄວາມສໍາເລັດຂອງການສະກັດເອົາຫຼຸດລົງຢ່າງຫຼວງຫຼາຍ.

ໝາຍເຫດ 8:ເງື່ອນໄຂທາງເສດຖະກິດພຽງແຕ່ສໍາລັບການສະກັດເອົາ RNA ສົບຜົນສໍາເລັດແມ່ນຜົນສໍາເລັດໃນການທົດລອງຕໍ່ໄປ, ບໍ່ແມ່ນຜົນຜະລິດ.

10 ແຫຼ່ງທີ່ມາຂອງການປົນເປື້ອນ RNase

1. ນິ້ວມືແມ່ນແຫຼ່ງທໍາອິດຂອງເອນໄຊທີ່ເກີດຈາກພາຍນອກ, ສະນັ້ນຕ້ອງໃສ່ຖົງມືແລະປ່ຽນແທນເລື້ອຍໆ.ນອກຈາກນັ້ນ, ຫນ້າກາກຍັງຕ້ອງໄດ້ໃສ່, ເພາະວ່າການຫາຍໃຈຍັງເປັນແຫຼ່ງທີ່ສໍາຄັນຂອງ enzymes.ຜົນປະໂຫຍດເພີ່ມເຕີມຂອງການໃສ່ຫນ້າກາກໃສ່ຖົງມືແມ່ນເພື່ອປົກປ້ອງຜູ້ທົດລອງ.

2. ຄໍາແນະນໍາທໍ່ທໍ່ centrifuge, pipettes – RNase ບໍ່ສາມາດ inactivated ໂດຍການຂ້າເຊື້ອຢ່າງດຽວ, ດັ່ງນັ້ນຄໍາແນະນໍາ pipette ແລະທໍ່ centrifuge ຄວນໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍ DEPC, ເຖິງແມ່ນວ່າພວກເຂົາຖືກຫມາຍວ່າເປັນ DEPC ປິ່ນປົວ.ມັນດີທີ່ສຸດທີ່ຈະໃຊ້ທໍ່ທໍ່ສໍາລັບຈຸດປະສົງພິເສດ, ເຊັດມັນດ້ວຍລູກຝ້າຍທີ່ມີເຫຼົ້າ 75% ກ່ອນທີ່ຈະໃຊ້, ໂດຍສະເພາະແມ່ນ rod;ນອກຈາກນັ້ນ, ໃຫ້ແນ່ໃຈວ່າບໍ່ໃຊ້ເຄື່ອງກໍາຈັດຫົວ.

3. ນ້ໍາ / buffer ຈະຕ້ອງບໍ່ມີການປົນເປື້ອນ RNase.

4. ຢ່າງຫນ້ອຍຕາຕະລາງການທົດສອບຄວນໄດ້ຮັບການເຊັດໃຫ້ສະອາດດ້ວຍບານຝ້າຍເຫຼົ້າ 75%.

5.Endogenous RNase ແພຈຸລັງທັງຫມົດປະກອບດ້ວຍ enzymes endogenous, ດັ່ງນັ້ນການແຊ່ແຂງໄວຂອງເນື້ອເຍື່ອທີ່ມີໄນໂຕຣເຈນຂອງແຫຼວແມ່ນວິທີທີ່ດີທີ່ສຸດເພື່ອຫຼຸດຜ່ອນການເຊື່ອມໂຊມ.ວິທີການເກັບຮັກສາໄນໂຕຣເຈນຂອງແຫຼວ / ຝຸ່ນແມ່ນແນ່ນອນບໍ່ສະດວກ, ແຕ່ມັນເປັນວິທີດຽວສໍາລັບເນື້ອເຍື່ອທີ່ມີລະດັບສູງຂອງ enzymes endogenous.

6. ຕົວຢ່າງ RNA ຜະລິດຕະພັນສະກັດ RNA ອາດມີຮ່ອງຮອຍຂອງການປົນເປື້ອນ RNase.

7. ການສະກັດເອົາ Plasmid ການສະກັດເອົາ Plasmid ມັກຈະໃຊ້ Rnase ເພື່ອທໍາລາຍ RNA, ແລະ Rnase ທີ່ເຫຼືອຄວນຈະຖືກຍ່ອຍດ້ວຍ Proteinase K ແລະສະກັດໂດຍ PCI.

8. ການເກັບຮັກສາ RNA ເຖິງແມ່ນວ່າມັນຖືກເກັບຮັກສາໄວ້ໃນອຸນຫະພູມຕ່ໍາ, ປະລິມານການຕິດຕາມຂອງ RNase ຈະເຮັດໃຫ້ເກີດການເຊື່ອມໂຊມຂອງ RNA.ການແກ້ໄຂທີ່ດີທີ່ສຸດສໍາລັບການເກັບຮັກສາ RNA ໃນໄລຍະຍາວແມ່ນການ suspension ເກືອ / ເຫຼົ້າ, ເນື່ອງຈາກວ່າເຫຼົ້າ inhibits ກິດຈະກໍາ enzymatic ທັງຫມົດຢູ່ໃນອຸນຫະພູມຕ່ໍາ.

9. ເມື່ອ cations (Ca, Mg) ບັນຈຸ ions ເຫຼົ່ານີ້, ການໃຫ້ຄວາມຮ້ອນຢູ່ທີ່ 80C ເປັນເວລາ 5 ນາທີຈະເຮັດໃຫ້ RNA ຖືກຕັດ, ດັ່ງນັ້ນຖ້າ RNA ຕ້ອງການຄວາມຮ້ອນ, ການແກ້ໄຂການເກັບຮັກສາຈະຕ້ອງມີສານ chelating (1mM Sodium Citrate, pH 6.4).

10. Enzymes ທີ່ໃຊ້ໃນການທົດລອງຕໍ່ໄປອາດຈະຖືກປົນເປື້ອນໂດຍ RNase.

10 ຄໍາແນະນໍາສໍາລັບການສະກັດ RNA

1: ປ້ອງກັນກິດຈະກໍາ RNase ຢ່າງໄວວາ.ຕົວຢ່າງຖືກແຊ່ແຂງຢ່າງໄວວາຫຼັງຈາກການລວບລວມ, ແລະ RNase ແມ່ນ inactivated ໂດຍການດໍາເນີນງານຢ່າງໄວວາໃນລະຫວ່າງການ lysis.

2: ເລືອກວິທີການສະກັດເອົາທີ່ເຫມາະສົມສໍາລັບເນື້ອເຍື່ອທີ່ມີເນື້ອໃນ ribozyme ສູງ, ແລະເນື້ອເຍື່ອ adipose ແມ່ນດີທີ່ສຸດທີ່ຈະໃຊ້ວິທີການທີ່ມີ phenol.

3: ຄຸນນະພາບການຄາດເດົາຮຽກຮ້ອງໃຫ້ມີພາກເຫນືອ, ການກໍ່ສ້າງຫ້ອງສະຫມຸດ cDNA ຕ້ອງການຄວາມສົມບູນສູງ, ແລະ RT-PCR ແລະ RPA (ການປະເມີນການປົກປ້ອງ Ribonuclease) ບໍ່ຕ້ອງການຄວາມສົມບູນສູງ.RT-PCR ຕ້ອງການຄວາມບໍລິສຸດສູງ (ສານຍັບຍັ້ງ enzyme residues).

4: ການປະສົມພັນຢ່າງລະອຽດແມ່ນກຸນແຈໃນການປັບປຸງຜົນຜະລິດແລະການຫຼຸດຜ່ອນການເຊື່ອມໂຊມ.

5: ກວດເບິ່ງຄວາມສົມບູນຂອງການກວດຫາ RNA electrophoresis, 28S: 18S = 2: 1 ເປັນສັນຍານທີ່ສົມບູນ, 1: 1 ຍັງຍອມຮັບສໍາລັບການທົດລອງສ່ວນໃຫຍ່.

6: ການກໍາຈັດ DNA ສໍາລັບ RT-PCR, ການວິເຄາະ array ມັນດີທີ່ສຸດທີ່ຈະໃຊ້ Dnase I ເພື່ອເອົາ DNA.

7: ຫຼຸດຜ່ອນການປົນເປື້ອນຂອງ enzymes exogenous - enzymes ບໍ່ສາມາດນໍາເຂົ້າຈາກພາຍນອກ.

8: ເມື່ອໃສ່ອາຊິດນິວຄລີອິກທີ່ມີຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຕໍ່າ, ຄວນເພີ່ມສານຕ້ານຝົນຮ່ວມກັນ.ແຕ່ເພື່ອປ້ອງກັນການ precipitant ຮ່ວມທີ່ມີ enzymes ແລະການປົນເປື້ອນ DNA.

9: ການລະລາຍ RNA ຢ່າງລະອຽດ, ຖ້າຈໍາເປັນ, ໃຫ້ຄວາມຮ້ອນທີ່ 65C ເປັນເວລາ 5 ນາທີ.

ວິທີການເກັບຮັກສາທີ່ເຫມາະສົມ

ມັນສາມາດຖືກເກັບໄວ້ຢູ່ທີ່ -20C ໃນເວລາສັ້ນໆ, ແລະຢູ່ທີ່ -80C ສໍາລັບເວລາດົນນານ.ຂັ້ນຕອນທໍາອິດໃນການປັບປຸງຜົນຜະລິດ RNA ແມ່ນເພື່ອຮັບຮູ້ວ່າເນື້ອໃນ RNA ຂອງຕົວຢ່າງທີ່ແຕກຕ່າງກັນແຕກຕ່າງກັນຢ່າງຫຼວງຫຼາຍ.ຄວາມອຸດົມສົມບູນສູງ (2-4ug/mg) ເຊັ່ນ: ຕັບ, ຕັບ, ຫົວໃຈ, ຄວາມອຸດົມສົມບູນປານກາງ (0.05-2ug/mg) ເຊັ່ນ: ສະໝອງ, ຕົວອ່ອນ, ໝາກໄຂ່ຫຼັງ, ປອດ, thymus, ຮວຍໄຂ່, ຄວາມອຸດົມສົມບູນຕໍ່າ (<0.05ug/mg) mg) ເຊັ່ນ ພົກຍ່ຽວ, ກະດູກ, ໄຂມັນ.

1: ຈຸລັງ Lyse ເພື່ອປ່ອຍ RN – ຖ້າ RNA ບໍ່ໄດ້ຖືກປ່ອຍອອກມາ, ຜົນຜະລິດຈະຫຼຸດລົງ.ການເຮັດໃຫ້ homogenization ໄຟຟ້າເຮັດວຽກໄດ້ດີກວ່າວິທີການ homogenization ອື່ນໆ, ແຕ່ອາດຈະຈໍາເປັນຕ້ອງໄດ້ສົມທົບກັບວິທີການອື່ນໆ, ເຊັ່ນ: mashing ໄນໂຕຣເຈນຂອງແຫຼວ, ການຍ່ອຍອາຫານ enzymatic (Lysozyme / Lyticase)

2: ການເພີ່ມປະສິດທິພາບຂອງວິທີການສະກັດເອົາ.ບັນຫາໃຫຍ່ທີ່ສຸດກັບວິທີການທີ່ໃຊ້ phenol ແມ່ນການແບ່ງຊັ້ນບໍ່ຄົບຖ້ວນແລະການສູນເສຍ RNA ບາງສ່ວນ ( supernatant ບໍ່ສາມາດເອົາອອກຫມົດ).stratification ທີ່ບໍ່ສົມບູນແມ່ນເນື່ອງມາຈາກເນື້ອໃນຂອງອາຊິດ nucleic ແລະທາດໂປຼຕີນສູງ, ເຊິ່ງສາມາດແກ້ໄຂໄດ້ໂດຍການເພີ່ມປະລິມານຂອງ lysate ທີ່ໃຊ້ຫຼືຫຼຸດຜ່ອນຈໍານວນຕົວຢ່າງ.ຂັ້ນຕອນຂອງການສະກັດເອົາ chloroform ໄດ້ຖືກເພີ່ມເຂົ້າໄປໃນເນື້ອເຍື່ອ adipose.ການ​ສູນ​ເສຍ RNA ສາ​ມາດ​ໄດ້​ຮັບ​ການ​ຫຼຸດ​ຜ່ອນ​ໂດຍ back-pumping ຫຼື​ໂດຍ​ການ​ເອົາ​ຊັ້ນ​ອົງ​ກອນ​ທີ່​ປະ​ຕິ​ບັດ​ຕາມ​ໂດຍ centrifugation​.ບັນຫາໃຫຍ່ທີ່ສຸດກັບວິທີການທີ່ອີງໃສ່ຖັນແມ່ນຕົວຢ່າງເກີນ.

ຄໍາແນະນໍາການສະກັດເອົາຄລາສສິກ

1. ການຟອກຟີນອລ: ຕື່ມປະລິມານທີ່ເທົ່າທຽມກັນຂອງ 1: 1 Phenol/Chloroform ແລະປະສົມຢ່າງແຂງແຮງສໍາລັບ 1-2 ນາທີ.Centrifuge ດ້ວຍຄວາມໄວສູງສໍາລັບ 2 ນາທີ.ລະມັດລະວັງເອົາ supernatant (80-90%).ບໍ່ເຄີຍໄປຫາຊັ້ນກາງ.ປະລິມານທີ່ເທົ່າທຽມກັນຂອງການແກ້ໄຂປະຕິກິລິຍາສາມາດຖືກເພີ່ມໃສ່ Phenol/Chloroform ແລະ supernatant ເອົາອອກ.ທັງສອງ supernatants ສາມາດຖືກປະສົມເຂົ້າກັນສໍາລັບ precipitation ອາຊິດ nucleic ເພື່ອປັບປຸງຜົນຜະລິດ.ຢ່າອ່ອນໂຍນເກີນໄປໃນເວລາປະສົມ, ແລະຢ່າພະຍາຍາມເອົາສິ່ງມະຫັດສະຈັນທັງຫມົດອອກ.

2. ການລ້າງດ້ວຍ 70-80% ethanol: ໃນລະຫວ່າງການລ້າງ, ອາຊິດນິວຄລີອິກຕ້ອງຖືກໂຈະເພື່ອຮັບປະກັນວ່າເກືອທີ່ຕົກຄ້າງຖືກລ້າງອອກ.ໃນເວລາດຽວກັນ, ທັນທີຫຼັງຈາກ pouring ເອທານອນອອກ, centrifuge ດ້ວຍຄວາມໄວສູງສໍາລັບສອງສາມວິນາທີ, ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນເອົາເອທານອນທີ່ຕົກຄ້າງອອກດ້ວຍ pipette.ລະລາຍຫຼັງຈາກຢືນຢູ່ໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງສໍາລັບ 5-10 ນາທີ.

11. ການສະກັດເອົາອົງການຈັດຕັ້ງພິເສດ

1. ເນື້ອເຍື່ອ Fibrous: ກຸນແຈໃນການສະກັດ RNA ຈາກເນື້ອເຍື່ອເຊັ່ນ: ກ້າມເນື້ອຫົວໃຈ/ໂຄງກະດູກ ແມ່ນການລົບກວນເນື້ອເຍື່ອທັງໝົດ.ແພຈຸລັງເຫຼົ່ານີ້ມີຄວາມຫນາແຫນ້ນຂອງເຊນຕ່ໍາ, ດັ່ງນັ້ນປະລິມານຂອງ RNA ຕໍ່ຫນ່ວຍນ້ໍາຫນັກຂອງເນື້ອເຍື່ອແມ່ນຕໍ່າ, ແລະມັນດີທີ່ສຸດທີ່ຈະໃຊ້ຈໍານວນເລີ່ມຕົ້ນຫຼາຍເທົ່າທີ່ເປັນໄປໄດ້.ໃຫ້ແນ່ໃຈວ່າຈະ grind ເນື້ອເຍື່ອຢ່າງລະອຽດພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂ freezing.

2. ເນື້ອເຍື່ອທີ່ມີທາດໂປຼຕີນ / ໄຂມັນສູງ: ໄຂມັນໃນສະຫມອງ / ຜັກແມ່ນສູງ.ຫຼັງຈາກການສະກັດເອົາ PCI, supernatant ມີ floccules ສີຂາວ.supernatant ຕ້ອງໄດ້ຮັບການສະກັດຄືນໃຫມ່ດ້ວຍ chloroform.

3. ເນື້ອເຍື່ອທີ່ມີອາຊິດນິວຄລີອິກ / ribozyme ສູງ: ມ້າມ / thymus ມີອາຊິດນິວເຄຼຍແລະເນື້ອໃນ ribozyme ສູງ.ການຂັດເນື້ອເຍື່ອພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂທີ່ແຊ່ແຂງຕາມມາດ້ວຍການເຮັດໃຫ້ເປັນ homogenization ຢ່າງໄວວາສາມາດ inactivate ribozymes ໄດ້.ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ຖ້າ lysate ແມ່ນ viscous ເກີນໄປ (ເນື່ອງຈາກເນື້ອໃນອາຊິດ nucleic ສູງ), ການສະກັດເອົາ PCI ຈະບໍ່ສາມາດ stratify ໄດ້ປະສິດທິພາບ;ການເພີ່ມ lysate ເພີ່ມເຕີມສາມາດແກ້ໄຂບັນຫານີ້ໄດ້.ການສະກັດເອົາ PCI ຫຼາຍຄັ້ງສາມາດເອົາ DNA ທີ່ຕົກຄ້າງໄດ້ຫຼາຍຂຶ້ນ.ຖ້າມີ precipitate ສີຂາວເກີດຂຶ້ນທັນທີຫຼັງຈາກເພີ່ມເຫຼົ້າ, ມັນຊີ້ໃຫ້ເຫັນເຖິງການປົນເປື້ອນ DNA.ການສະກັດເອົາຄືນໃຫມ່ດ້ວຍກົດ PCI ​​ຫຼັງຈາກການລະລາຍສາມາດກໍາຈັດການປົນເປື້ອນຂອງ DNA.

4. ເນື້ອເຍື່ອພືດ: ເນື້ອເຍື່ອຂອງພືດມີຄວາມຊັບຊ້ອນກວ່າເນື້ອເຍື່ອສັດ.ໂດຍທົ່ວໄປແລ້ວ, ພືດແມ່ນດິນພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂໄນໂຕຣເຈນຂອງແຫຼວ, ດັ່ງນັ້ນການທໍາລາຍ RNA ໂດຍ enzymes endogenous ແມ່ນບໍ່ທໍາມະດາ.ຖ້າບັນຫາການເຊື່ອມໂຊມບໍ່ໄດ້ຖືກແກ້ໄຂ, ມັນເກືອບແນ່ນອນແມ່ນເກີດຈາກຄວາມບໍ່ສະອາດທີ່ມີຢູ່ໃນຕົວຢ່າງ.impurities ທີ່ມີຢູ່ໃນພືດຈໍານວນຫຼາຍຈະນໍາໄປສູ່ການຕົກຄ້າງ, ແລະເຫດຜົນຂອງ residue ມັກຈະເປັນເພາະວ່າ impurities ເຫຼົ່ານີ້ມີຄວາມຄ້າຍຄືກັນບາງຢ່າງກັບ RNA: ເຈົ້າ precipitate ແລະຂ້າພະເຈົ້າ precipitate, ແລະທ່ານ adsorb ແລະຂ້າພະເຈົ້າ adsorb.ລັກສະນະເຫຼົ່ານີ້ກໍານົດວ່າພວກເຂົາເປັນ inhibitors enzyme ທີ່ເຂັ້ມແຂງຫຼາຍ.

ໃນປັດຈຸບັນ, ສານສະກັດຈາກ RNA ທາງດ້ານການຄ້າສາມາດປັບຕົວເຂົ້າກັບເນື້ອເຍື່ອສັດເກືອບທັງຫມົດດ້ວຍການປັບຕົວເລັກນ້ອຍ, ແຕ່ມີສານສະກັດຈາກ RNA ການຄ້າຫນ້ອຍທີ່ສາມາດເຫມາະສົມກັບເນື້ອເຍື່ອພືດສ່ວນໃຫຍ່.ໂຊກດີ, Foregene ສາມາດສະຫນອງການພິເສດຊຸດສະກັດ RNA ຂອງພືດ, ພວກ​ເຮົາ​ມີPlant Total ຊຸດ RNA Isolation, Plant Total RNA Isolation Kit Plus.ຊະນິດສຸດທ້າຍແມ່ນອອກແບບສະເພາະສໍາລັບພືດທີ່ມີເນື້ອໃນ polysaccharide ແລະ polyphenol ສູງ.ສໍາລັບການສະກັດເອົາ RNA, ຄວາມຄິດເຫັນຈາກຜູ້ໃຊ້ຫ້ອງທົດລອງແມ່ນດີໂດຍສະເພາະ.

12. ຜົນກະທົບຂອງການແຊ່ແຂງຕົວຢ່າງ ແລະ thawing ຕົວຢ່າງ frozen ອາດຈະມີຂະຫນາດໃຫຍ່, ແລະມັນຈໍາເປັນຕ້ອງໄດ້ຕັດອອກກ່ອນທີ່ຈະຖືກນໍາໃຊ້ສໍາລັບການສະກັດ RNA.ຕົວຢ່າງມີແນວໂນ້ມທີ່ຈະລະລາຍ (ບາງສ່ວນ) ໃນລະຫວ່າງການຕັດ.ຕົວຢ່າງທີ່ແຊ່ແຂໍງອາດຈະຕ້ອງໄດ້ຮັບການຊັ່ງນໍ້າຫນັກກ່ອນທີ່ຈະສະກັດ RNA, ແລະການ thawing ແນ່ນອນຈະເກີດຂຶ້ນໃນລະຫວ່າງຂະບວນການນີ້.ບາງຄັ້ງ, ການ thawing ຂອງຕົວຢ່າງຍັງເກີດຂຶ້ນໃນລະຫວ່າງການຂະບວນການໂມ້ໄນໂຕຣເຈນຂອງແຫຼວ;ຫຼືຕົວຢ່າງ frozen ໄດ້ຖືກເພີ່ມໂດຍກົງກັບ lysate ໂດຍບໍ່ມີການ milling ໄນໂຕຣເຈນຂອງແຫຼວ, ແລະການ thawing ແນ່ນອນຈະເກີດຂຶ້ນກ່ອນທີ່ຈະ homogenization ສໍາເລັດ.ການ​ທົດ​ລອງ​ໄດ້​ສະ​ແດງ​ໃຫ້​ເຫັນ​ວ່າ​ເນື້ອ​ເຍື່ອ frozen ແມ່ນ​ມີ​ຄວາມ​ສ່ຽງ​ຕໍ່​ການ​ເຊື່ອມ​ໂຊມ RNA ໃນ​ລະ​ຫວ່າງ​ການ thawing ກ​່​ວາ​ເນື້ອ​ເຍື່ອ​ສົດ​.ເຫດຜົນທີ່ເປັນໄປໄດ້: ຂະບວນການ freeze-thaw disrupts ໂຄງສ້າງພາຍໃນຈຸລັງ, ເຮັດໃຫ້ມັນງ່າຍຂຶ້ນສໍາລັບ enzymes endogenous ເຂົ້າມາຕິດຕໍ່ໂດຍກົງກັບ RNA.

13. ການຕັດສິນຄຸນນະພາບ RNA ປົກກະຕິແລ້ວ, electrophoresis ແມ່ນໃຊ້ເພື່ອຕັດສິນຄວາມສົມບູນຂອງ RNA, ແລະ A260/A280 ແມ່ນໃຊ້ເພື່ອຕັດສິນຄວາມບໍລິສຸດຂອງ RNA.ໃນທາງທິດສະດີ, RNA intact ມີອັດຕາສ່ວນ 28S:18S = 2.7:1, ແລະຂໍ້ມູນສ່ວນໃຫຍ່ເນັ້ນອັດຕາສ່ວນຂອງ 28S:18S = 2:1.ຄວາມຈິງແລ້ວແມ່ນວ່າເກືອບບໍ່ມີ RNA ທີ່ສະກັດຈາກຕົວຢ່າງອື່ນນອກເຫນືອຈາກຈຸລັງຢູ່ໃນອັດຕາສ່ວນ 2: 1 (ອັນນີ້ແມ່ນໄດ້ຮັບໂດຍໃຊ້ Agilent Bioanalyzer).

ຜົນໄດ້ຮັບ electrophoresis ຂອງ RNA ໄດ້ຮັບຜົນກະທົບຈາກຫຼາຍປັດໃຈ, ລວມທັງໂຄງສ້າງຂັ້ນສອງ, ເງື່ອນໄຂ electrophoresis, ການໂຫຼດຕົວຢ່າງ, ລະດັບຄວາມອີ່ມຕົວໂດຍ EB, ແລະອື່ນໆ. ໃຊ້ electrophoresis ພື້ນເມືອງເພື່ອກວດຫາ RNA ແລະໃຊ້ DNA Marker ເປັນຕົວຄວບຄຸມ.ຖ້າ 28S ທີ່ 2kb ແລະ 18S ທີ່ 0.9kb ແມ່ນຈະແຈ້ງ, ແລະ 28S: 18S > 1, ຄວາມສົມບູນສາມາດຕອບສະຫນອງຄວາມຕ້ອງການຂອງການທົດລອງຕໍ່ໄປຫຼາຍທີ່ສຸດ.

A260/A280 ແມ່ນຕົວຊີ້ວັດທີ່ເຮັດໃຫ້ເກີດຄວາມສັບສົນຫຼາຍ.ກ່ອນອື່ນ ໝົດ, ມັນ ຈຳ ເປັນຕ້ອງອະທິບາຍຄວາມ ໝາຍ ເດີມຂອງຕົວຊີ້ວັດນີ້ ສຳ ລັບອາຊິດນິວເຄຼຍ: RNA ບໍລິສຸດ, A260/280 = ປະມານ 2.0.RNA ບໍລິສຸດແມ່ນ 'ສາເຫດ' ແລະ A260 / A280 = 2 ແມ່ນ 'ຜົນກະທົບ'.ໃນປັດຈຸບັນທຸກຄົນກໍາລັງໃຊ້ A260 / A280 ເປັນ 'ສາເຫດ', ຄິດວ່າ "ຖ້າ A260 / A280 = 2, ຫຼັງຈາກນັ້ນ RNA ແມ່ນບໍລິສຸດ", ເຊິ່ງທໍາມະຊາດເຮັດໃຫ້ເກີດຄວາມສັບສົນ.

ຖ້າທ່ານສົນໃຈ, ທ່ານສາມາດເພີ່ມ reagent ເລັກນ້ອຍທີ່ມັກໃຊ້ໃນການສະກັດ, ເຊັ່ນ: phenol, guanidine isothiocyanate, PEG, ແລະອື່ນໆ, ໃສ່ຕົວຢ່າງ RNA ຂອງທ່ານ, ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນວັດແທກອັດຕາສ່ວນ A260 / A280.ຄວາມເປັນຈິງແມ່ນວ່າທາດປະສົມຫຼາຍຊະນິດທີ່ໃຊ້ສໍາລັບການສະກັດເອົາ RNA, ເຊັ່ນດຽວກັນກັບສິ່ງປົນເປື້ອນຫຼາຍໃນຕົວຢ່າງ, ດູດຊຶມປະມານ A260 ແລະ A280, ຜົນກະທົບຕໍ່ A260 / A280.

ວິທີການໃຫ້ຄໍາແນະນໍາທີ່ສຸດໃນປະຈຸບັນແມ່ນການສະແກນຕົວຢ່າງ RNA ໃນລະດັບ 200-300 nm.ເສັ້ນໂຄ້ງຂອງ RNA ບໍລິສຸດມີລັກສະນະດັ່ງຕໍ່ໄປນີ້: ເສັ້ນໂຄ້ງແມ່ນລຽບ, A230 ແລະ A260 ແມ່ນສອງຈຸດ inflection, A300 ຢູ່ໃກ້ກັບ 0, A260 / A280 = ປະມານ 2.0, ແລະ A260 / A230 = ປະມານ 2.0.ຖ້າຂໍ້ມູນການສະແກນບໍ່ສາມາດໃຊ້ໄດ້, ອັດຕາສ່ວນ A260/A230 ຈະຕ້ອງຖືກກໍານົດເຊັ່ນກັນ, ເພາະວ່າອັດຕາສ່ວນນີ້ແມ່ນມີຄວາມອ່ອນໄຫວຫຼາຍຕໍ່ກັບການເອົາສິ່ງປົນເປື້ອນທັງຫມົດທີ່ສົ່ງຜົນກະທົບຕໍ່ປະຕິກິລິຍາ enzymatic.ຄໍານຶງເຖິງຂອບເຂດເສັ້ນຂອງອຸປະກອນ (0.1-0.5 ສໍາລັບ A260).

ມີສອງປະກົດການທີ່ເປັນປະໂຫຍດອື່ນໆ: ອັດຕາສ່ວນຈະຕ່ໍາປະມານ 0.3 ເມື່ອ A260 / A280 ຖືກວັດແທກໃນນ້ໍາ;ໃນຂະນະທີ່ອັດຕາສ່ວນທີ່ວັດແທກໃນ 10 mM EDTA ແມ່ນປະມານ 0.2 ສູງກວ່າທີ່ວັດແທກໃນ 1 mM EDTA.

ຜະ​ລິດ​ຕະ​ພັນ​ທີ່​ກ່ຽວ​ຂ້ອງ:

ຈີນ Plant Total RNA Isolation Kit ຜູ້ຜະລິດແລະຜູ້ສະຫນອງ |Foregene (foreivd.com)

ຊຸດ RNA isolation ຜູ້ສະຫນອງແລະໂຮງງານ |ຜູ້ຜະລິດຊຸດການແຍກ RNA ຂອງຈີນ (foreivd.com)

ຊຸດການແຍກ RNA – Foregene Co., Ltd. (foreivd.com)