PCR ໂດຍກົງແມ່ນປະຕິກິລິຍາທີ່ໃຊ້ເນື້ອເຍື່ອສັດຫຼືພືດໂດຍກົງເພື່ອຂະຫຍາຍໂດຍບໍ່ມີການສະກັດເອົາອາຊິດນິວເຄຼຍ.ໃນຫຼາຍວິທີ, PCR ໂດຍກົງເຮັດວຽກຄືກັບ PCR ປົກກະຕິ

ຄວາມແຕກຕ່າງຕົ້ນຕໍແມ່ນ buffer ທີ່ກໍາຫນົດເອງທີ່ໃຊ້ໃນ PCR ໂດຍກົງ, ຕົວຢ່າງສາມາດຖືກປະຕິບັດໂດຍກົງກັບປະຕິກິລິຍາ PCR ໂດຍບໍ່ມີການສະກັດເອົາອາຊິດນິວເຄຼຍ, ແຕ່ມີຄວາມຕ້ອງການທີ່ສອດຄ້ອງກັນສໍາລັບຄວາມທົນທານຂອງ enzymes ແລະຄວາມເຂົ້າກັນໄດ້ຂອງ buffer ທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບປະຕິກິລິຍາ PCR ໂດຍກົງ.

ເຖິງແມ່ນວ່າມີ inhibitors PCR ຫຼາຍຫຼືຫນ້ອຍໃນຕົວຢ່າງທົ່ວໄປ, PCR ໂດຍກົງຍັງສາມາດບັນລຸການຂະຫຍາຍທີ່ເຊື່ອຖືໄດ້ພາຍໃຕ້ການປະຕິບັດຂອງ enzymes ແລະ buffers.ປະຕິກິລິຍາ PCR ແບບດັ້ງເດີມຕ້ອງການອາຊິດນິວຄລີອິກທີ່ມີຄຸນນະພາບສູງເປັນແມ່ແບບ, ເຊິ່ງສາມາດຍັບຍັ້ງຄວາມຄືບຫນ້າຂອງປະຕິກິລິຍາ PCR ຖ້າແມ່ແບບມີທາດໂປຼຕີນແລະສິ່ງປົນເປື້ອນອື່ນໆ.Direct PCR ປະຈຸບັນແມ່ນຫນຶ່ງໃນເຕັກໂນໂລຢີທີ່ມີຄວາມນິຍົມຫຼາຍໃນຂົງເຂດການວິນິດໄສໂມເລກຸນ.

01 Direct PCR ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ໃນເບື້ອງຕົ້ນສໍາລັບສັດແລະພືດ

ຄໍາຮ້ອງສະຫມັກຂອງ PCR ໂດຍກົງແມ່ນໃນພາກສະຫນາມຂອງສັດແລະພືດ, ເຊັ່ນ: ເລືອດ, ເນື້ອເຍື່ອແລະຜົມຂອງຫນູ, ແມວ, ໄກ່, ກະຕ່າຍ, ແກະ, ງົວ, ແລະອື່ນໆ, ໃບພືດແລະເມັດ, ແລະອື່ນໆ, ນໍາໃຊ້ເພື່ອສຶກສາ genotyping, transgenic, plasmid ກວດພົບ, ການວິເຄາະ Gene knockout, ການກໍານົດແຫຼ່ງ DNA, ການກໍານົດສາຍພັນອື່ນໆ, SNP.

ທົ່ງນາເຫຼົ່ານີ້ມີລັກສະນະທົ່ວໄປບາງຢ່າງ, ນັ້ນແມ່ນ, ເນື້ອໃນ gene ເປົ້າຫມາຍແມ່ນຂ້ອນຂ້າງສູງແລະການສະກັດເອົາອາຊິດ nucleic ແມ່ນມີບັນຫາ, ດັ່ງນັ້ນ PCR ໂດຍກົງບໍ່ພຽງແຕ່ສາມາດປະຫຍັດເວລາແລະມີຜົນກະທົບເລັກນ້ອຍຕໍ່ຜົນໄດ້ຮັບ, ແຕ່ຍັງປະຫຍັດຄ່າໃຊ້ຈ່າຍ.

PCR ໂດຍກົງທີ່ໃຊ້ໃນການກວດຫາເຊື້ອພະຍາດແມ່ນເປັນເລື່ອງຂອງປີທີ່ຜ່ານມາ, ບາງຜູ້ຜະລິດ reagent PCR ໄດ້ພະຍາຍາມຫຼາຍໃນທິດທາງນີ້ໃນເວລາສ້າງນະວັດຕະກໍາ.ໂດຍສະເພາະໃນການລະບາດຂອງ COVID-19 ນີ້, ຜະລິດຕະພັນກວດຫາດັ່ງກ່າວຫຼາຍຊະນິດໄດ້ປະກົດຕົວຢູ່ໃນຕະຫຼາດ, ເຊັ່ນ: ຊຸດກວດຫາອາຊິດນິວເຄຼຍຂອງ SARS-CoV-2 (Multiplex PCR Fluorescent Probe Method) ທີ່ຄົ້ນຄວ້າ ແລະ ພັດທະນາໂດຍ Foregene, ເຊິ່ງນຳໃຊ້ເທັກໂນໂລຍີ RT PCR ໃນເວລາຈິງ (rRT-PCR) ເພື່ອກວດຫາຄຸນນະພາບຂອງ SARS-CoVsongsary 2-seal-time ຂອງມະນຸດ. .

Foregene ແມ່ນຫນຶ່ງໃນບໍລິສັດທີ່ໃຊ້ເຕັກໂນໂລຢີ Direct PCR, ສໍາລັບການກວດສອບ ORF1ab, N, E, ແລະປົກກະຕິ.ຕົວແປ lineages ອາຊິດ nucleic ໃນ nasopharyngeal ຫຼື oropharyngeal swab ຕົວຢ່າງເຊັ່ນ SARS-CoV-2 B.1.1.7 lineage (UK), B.1.351 lineage (ZA), B.1.617 lineage (IND) ແລະ P.1 lineage (BR).

02  Reagents ທີ່ຈໍາເປັນສໍາລັບ PCR ໂດຍກົງ

ຕົວຢ່າງ Lysate

ຕົວຢ່າງ lysate ສາມາດຖືກຕັ້ງຄ່າດ້ວຍຕົວທ່ານເອງຫຼືຊື້.ຄວາມແຕກຕ່າງໃນອົງປະກອບຂອງຍີ່ຫໍ້ທີ່ແຕກຕ່າງກັນຂອງ lysate ຈະເຮັດໃຫ້ຄວາມສາມາດຂອງ lysing ແຕກຕ່າງກັນ, ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນເວລາ lysing ຈະແຕກຕ່າງກັນເລັກນ້ອຍ.ສໍາລັບຕົວຢ່າງ, ສໍາລັບການກະກຽມຕົວຢ່າງເນື້ອເຍື່ອສັດ, 30 ນາທີຫຼື lysis ຄ້າງຄືນແມ່ນແນະນໍາໂດຍທົ່ວໄປ, ແລະການແກ້ໄຂ lysis ສໍາລັບໄວຣັສແມ່ນຕັ້ງແຕ່ 3-10 ນາທີ.

PCR ແມ່ບົດປະສົມ

ມັນແນະນໍາໃຫ້ໃຊ້ DNA polymerase ເລີ່ມຕົ້ນຮ້ອນເພື່ອເສີມຂະຫຍາຍການຂະຫຍາຍສະເພາະແລະເພີ່ມຄວາມສາມາດໃນການຂະຫຍາຍ.ຫຼັກຂອງ PCR ໂດຍກົງແມ່ນ polymerase ທີ່ມີຄວາມທົນທານສູງ.

ກໍາຈັດຫຼືຍັບຍັ້ງອົງປະກອບໃນຕົວຢ່າງທີ່ມີຜົນກະທົບຕໍ່ການຂະຫຍາຍ DNA

ຫຼັງຈາກຕົວຢ່າງໄດ້ຖືກປຸງແຕ່ງດ້ວຍ lysate, ທາດໂປຼຕີນ, lipids ແລະສິ່ງເສດເຫຼືອຂອງຈຸລັງອື່ນໆຈະຖືກປ່ອຍອອກມາ, ສານເຫຼົ່ານີ້ຈະຍັບຍັ້ງປະຕິກິລິຍາ PCR.ດັ່ງນັ້ນ, PCR ໂດຍກົງຮຽກຮ້ອງໃຫ້ມີການເພີ່ມການໂຍກຍ້າຍຫຼື inhibitors ທີ່ສອດຄ້ອງກັນເພື່ອຫຼຸດຜ່ອນອິດທິພົນຂອງປັດໃຈເຫຼົ່ານີ້.

03  ການລວບລວມຫ້າຈຸດຄວາມຮູ້ຂອງ PCR ໂດຍກົງ

ທໍາອິດ, ເທກໂນໂລຍີ PCR ໂດຍກົງແມ່ນເຕັກໂນໂລຢີ PCR ໂດຍກົງສໍາລັບຕົວຢ່າງທາງຊີວະພາບຕ່າງໆ.ພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂດ້ານວິຊາການນີ້, ບໍ່ຈໍາເປັນຕ້ອງແຍກແລະສະກັດອາຊິດ nucleic, ໂດຍກົງນໍາໃຊ້ຕົວຢ່າງເນື້ອເຍື່ອເປັນວັດຖຸ, ແລະເພີ່ມ primers gene ເປົ້າຫມາຍແມ່ນເພື່ອປະຕິບັດປະຕິກິລິຍາ PCR.

ອັນທີສອງ, ເທກໂນໂລຍີ Direct PCR ບໍ່ພຽງແຕ່ເປັນເທມເພດການຂະຫຍາຍແບບ DNA ແບບດັ້ງເດີມ, ແຕ່ຍັງລວມເອົາແບບ RNA template reverse transcription PCR.

ອັນທີສາມ, ເທກໂນໂລຍີ PCR ໂດຍກົງບໍ່ພຽງແຕ່ປະຕິບັດປະຕິກິລິຍາ PCR ທີ່ມີຄຸນນະພາບເປັນປົກກະຕິກ່ຽວກັບຕົວຢ່າງຂອງເນື້ອເຍື່ອ, ແຕ່ຍັງປະກອບມີປະຕິກິລິຍາ qPCR ໃນເວລາຈິງ, ເຊິ່ງຮຽກຮ້ອງໃຫ້ລະບົບປະຕິກິລິຍາມີຄວາມສາມາດໃນການແຊກແຊງ fluorescence ຕ້ານການພື້ນຫລັງທີ່ເຂັ້ມແຂງແລະ fluorescence endogenous quenchers ຄວາມສາມາດຕ້ານການ.

ສີ່, ຕົວຢ່າງທີ່ຖືກເປົ້າຫມາຍໂດຍ Direct PCR ເຕັກໂນໂລຊີພຽງແຕ່ຕ້ອງການການປ່ອຍຕົວແມ່ແບບຂອງອາຊິດ nucleic, ແລະບໍ່ເອົາທາດໂປຼຕີນ, polysaccharides, ions ເກືອ, ແລະອື່ນໆທີ່ແຊກແຊງກັບປະຕິກິລິຍາ PCR.ເຊິ່ງຮຽກຮ້ອງໃຫ້ມີອາຊິດນິວຄລີອິກ polymerase ແລະ PCR Mix ໃນລະບົບປະຕິກິລິຍາມີຄວາມຕ້ານທານທີ່ດີເລີດແລະການປັບຕົວເພື່ອຮັບປະກັນການເຄື່ອນໄຫວຂອງເອນໄຊແລະຄວາມຖືກຕ້ອງຂອງ replication ພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂທີ່ສັບສົນ.

ອັນທີຫ້າ, ຕົວຢ່າງເນື້ອເຍື່ອທີ່ຖືກເປົ້າຫມາຍໂດຍ Direct PCR ເຕັກໂນໂລຢີໂດຍບໍ່ມີການຮັກສາການເສີມສ້າງອາຊິດ nucleic ແລະຈໍານວນແມ່ແບບມີຂະຫນາດນ້ອຍຫຼາຍ, ເຊິ່ງຮຽກຮ້ອງໃຫ້ລະບົບປະຕິກິລິຍາມີຄວາມອ່ອນໄຫວແລະປະສິດທິພາບການຂະຫຍາຍສູງທີ່ສຸດ.