-
ຊຸດສັດ PCR ໂດຍກົງ - UNG
ຊຸດນີ້ໃຊ້ລະບົບ lysis buffer ທີ່ເປັນເອກະລັກເພື່ອປົດປ່ອຍ DNA ພັນທຸ ກຳ ຈາກຕົວຢ່າງເນື້ອເຍື່ອຂອງສັດ ສຳ ລັບປະຕິກິລິຍາຂອງ PCR, ສະນັ້ນມັນ ເໝາະ ສຳ ລັບການທົດສອບພັນທຸ ກຳ ຂະ ໜາດ ໃຫຍ່.
ຂັ້ນຕອນການປ່ອຍຕົວ DNA ພັນທຸ ກຳ ຈາກ lysis buffer ແມ່ນ ສຳ ເລັດພາຍໃນ 10-30 ນາທີເວລາ 65°C. ບໍ່ມີຂະບວນການອື່ນໃດເຊັ່ນ: ທາດໂປຼຕີນແລະການ ກຳ ຈັດ RNA ແມ່ນ ຈຳ ເປັນ, ແລະ DNA ທີ່ຖືກປ່ອຍອອກມາສາມາດໃຊ້ເປັນແມ່ແບບ ສຳ ລັບປະຕິກິລິຍາຂອງ PCR.
2×PCR ງ່າຍTM ສົມ (UNG) ໃຊ້ dUTP ແທນ dTTP ບົນພື້ນຖານ 2×PCR ງ່າຍTM ຜະສົມ, ແລະເພີ່ມທາດ enzyme ຂອງ UNG (Uracil-N-glycosylase) ທີ່ສາມາດເຮັດໃຫ້ແມ່ແບບເສື່ອມໂຊມລົງໃນເວລາດຽວກັນ. ກ່ອນທີ່ຈະມີປະຕິກິລິຍາຂອງ PCR, ເອນໄຊຂອງ UNG ຖືກ ນຳ ໃຊ້ເພື່ອເຮັດໃຫ້ຜະລິດຕະພັນ PCR ເສື່ອມສະພາບ. ເອນໄຊຂອງ UNG ຈະບໍ່ມີຜົນຕໍ່ແມ່ແບບທີ່ບໍ່ມີສານ uracil, ໂດຍຮັບປະກັນຄວາມແນ່ນອນແລະຄວາມຖືກຕ້ອງຂອງການຂະຫຍາຍແລະປ້ອງກັນຄວາມເປັນໄປໄດ້ຂອງການປົນເປື້ອນຜະລິດຕະພັນ PCR ໃນລະຫວ່າງການທົດລອງພັນທຸ ກຳ ຂະ ໜາດ ໃຫຍ່.
D-Taq DNA polymerase ແມ່ນ DNA polymerase ທີ່ພັດທະນາເປັນພິເສດໂດຍ Foregene ສຳ ລັບປະຕິກິລິຍາ PCR ໂດຍກົງ. D-Taq DNA polymerase ມີຄວາມທົນທານຢ່າງແຂງແຮງຕໍ່ການຍັບຍັ້ງການປະຕິກິລິຍາ PCR ຫຼາຍໆຊະນິດ, ແລະສາມາດຂະຫຍາຍ ຈຳ ນວນຮ່ອງຮອຍຂອງ DNA ໃນລະບົບປະຕິກິລິຍາທີ່ສັບສົນຕ່າງໆ, ແລະຄວາມໄວໃນການຂະຫຍາຍສາມາດບັນລຸ 2Kb / min, ໂດຍສະເພາະແມ່ນ ເໝາະ ສົມກັບປະຕິກິລິຍາຂອງ PCR ໂດຍກົງ.
