ບໍ່ດົນມານີ້, ຂ້າພະເຈົ້າໄດ້ຄົ້ນພົບບາງສິ່ງບາງຢ່າງທີ່ຫນ້າປະຫລາດໃຈ!ຜູ້ຊ່ຽວຊານດ້ານການທົດລອງຂັ້ນສູງຫຼາຍຄົນທີ່ອ້ອມຮອບລາວບໍ່ຮູ້ບາງຈຸດຄວາມຮູ້ພື້ນຖານຂອງການທົດລອງ.

ຕົວຢ່າງ, ເຈົ້າສາມາດຕອບຄໍາຖາມຕໍ່ໄປນີ້ໄດ້ບໍ?

ມີຄວາມແຕກຕ່າງກັນລະຫວ່າງ OD260 ແລະ A260 ບໍ?ແຕ່ລະຄົນຫມາຍຄວາມວ່າແນວໃດ?
OD ແມ່ນຕົວຫຍໍ້ຂອງ optical density (optical density), A ແມ່ນຕົວຫຍໍ້ຂອງການດູດຊຶມ (absorbance), ທັງສອງແນວຄວາມຄິດແມ່ນຄືກັນ, "optical density" ແມ່ນ "absorbance", ແຕ່ "optical density" ແມ່ນສອດຄ່ອງກັບມາດຕະຖານແຫ່ງຊາດສ່ວນໃຫຍ່ແລະມາດຕະຖານຫຼາຍ.

ປົກກະຕິແລ້ວພວກເຮົາວັດແທກຄ່າ OD ທີ່ 260nm ເພື່ອຄິດໄລ່ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງອາຊິດນິວຄລີອິກ, ດັ່ງນັ້ນ 1OD ເປັນຕົວແທນແນວໃດ?
ອາຊິດນິວຄລີອິກມີຈຸດສູງສຸດຂອງການດູດຊຶມສູງສຸດຢູ່ທີ່ຄວາມຍາວຂອງຄື້ນ 260nm, ເຊິ່ງປະກອບດ້ວຍທັງ DNA ແລະ RNA, ເຊັ່ນດຽວກັນກັບຊິ້ນສ່ວນອາຊິດນິວເຄຼຍທີ່ແຕກຫັກ (ນີ້ແມ່ນຈຸດສໍາຄັນ).
ຄ່າ OD ທີ່ວັດແທກຄວາມຍາວຄື່ນ 260 nm ຖືກບັນທຶກເປັນ OD260.ຖ້າຕົວຢ່າງແມ່ນບໍລິສຸດ, ມູນຄ່າ OD260 ສາມາດຄິດໄລ່ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງຕົວຢ່າງອາຊິດນິວເຄຼຍ.
1 OD260 = 50 μg/ml dsDNA (DNA ສາຍສອງ)
= 37 μg/ml ssDNA (DNA ທີ່ມີສາຍດຽວ)
= 40 μg/ml RNA
= 30 μg/ml dNTPs (oligonucleotides)
ມີການເຊື່ອມຕໍ່ແລະຄວາມແຕກຕ່າງລະຫວ່າງ RT-PCR, Realtime-PCR ແລະ QPCR ບໍ?
RT-PCR ແມ່ນສັ້ນສໍາລັບ Reverse Transcription PCR
PCR ເວລາຈິງ = qPCR, ສັ້ນສໍາລັບ PCR ເວລາຈິງປະລິມານ
ເຖິງແມ່ນວ່າ PCR ໃນເວລາທີ່ແທ້ຈິງ (PCR ປະລິມານ fluorescent ທີ່ແທ້ຈິງ) ແລະ Reverse Transcription PCR (PCR reverse transcription) ທັງສອງເບິ່ງຄືວ່າຈະຫຍໍ້ເປັນ RT-PCR.ແຕ່ສົນທິສັນຍາສາກົນແມ່ນ: RT-PCR ໂດຍສະເພາະຫມາຍເຖິງ PCR transcription reverse.

nt, bp, ແລະ kb ທີ່ໃຊ້ທົ່ວໄປເພື່ອອະທິບາຍຄວາມຍາວຂອງ DNA/RNA ໃນຊີວະວິທະຍາແມ່ນຫຍັງ?
nt = nucleotide
bp = ຄູ່ຖານຄູ່ຖານ
kb = ກິໂລຖານ

ແນ່ນອນ, ເຈົ້າຈະບອກວ່າຫຼາຍຄົນບໍ່ສົນໃຈລາຍລະອຽດນ້ອຍໆເຫຼົ່ານີ້!ທຸກຄົນເຮັດແບບນີ້, ແລະບໍ່ມີໃຜຈະຖາມເຈົ້າວ່າມັນເປັນແນວໃດ.ເຈົ້າຮູ້ວ່ານີ້ບໍ່ຈໍາເປັນ, ແມ່ນບໍ?

ບໍ່, ບໍ່, ບໍ່, ມັນເປັນສິ່ງຈໍາເປັນຫຼາຍທີ່ຈະຮູ້ນີ້!ເພາະອັນໃດ?
ເພາະຢາກຂຽນບົດຄວາມ!ອ້າຍ!ບໍ່ວ່າເຈົ້າຈະຕັ້ງເປົ້າຮຽນຈົບ ຫຼື ຕິດຕາມຜົນການຄົ້ນຄວ້າວິທະຍາສາດ, ເຈົ້າຕ້ອງອີງໃສ່ບົດຄວາມທີ່ຈະເວົ້າ!

ການສະກັດເອົາອາຊິດນິວຄລີອິກຄວນຈະເປັນການທົດລອງທີ່ງ່າຍທີ່ສຸດ ແລະພື້ນຖານທີ່ສຸດ.ຄຸນນະພາບຂອງການສະກັດເອົາອາຊິດນິວຄລີອິກໂດຍກົງກໍານົດຜົນຂອງການທົດລອງຕໍ່ໄປ.

​ເຖິງ​ວ່າ​ຈະ​ເວົ້າ​ຫລາຍ​ເທື່ອ​ແລ້ວ, ​ແຕ່​ກໍ​ຍັງ​ມີ​ໝູ່​ເພື່ອນ​ຫລາຍ​ຄົນ​ທີ່​ບໍ່​ສົນ​ໃຈ.ເວລານີ້ຂ້ອຍຕັດສິນໃຈຍ້າຍອອກຈາກບົດຄວາມ!

ຂໍ້ມູນຕໍາ່ສຸດທີ່ສໍາລັບການພິມເຜີຍແຜ່ການທົດລອງ PCR ໃນເວລາຈິງປະລິມານ, ເອີ້ນວ່າ MIQE, ແມ່ນຊຸດຂອງຄໍາແນະນໍາການທົດລອງປະລິມານ fluorescence ທີ່ເປີດຕົວໃນລະດັບສາກົນ, ເຊິ່ງສະເຫນີມາດຕະຖານຂັ້ນຕ່ໍາສໍາລັບຂໍ້ມູນການທົດລອງທີ່ຈໍາເປັນສໍາລັບການປະເມີນການທົດລອງ PCR ປະລິມານ fluorescence ແລະເຜີຍແຜ່ບົດຄວາມ.ໂດຍຜ່ານເງື່ອນໄຂຂອງການທົດລອງແລະວິທີການວິເຄາະທີ່ໃຫ້ໂດຍນັກທົດລອງ, ຜູ້ທົບທວນສາມາດປະເມີນຄວາມຖືກຕ້ອງຂອງແຜນການທົດລອງຂອງນັກຄົ້ນຄວ້າໄດ້ດີຂຶ້ນ.

ສາມາດເຫັນໄດ້ວ່າໃນພາກຂອງການສະກັດເອົາອາຊິດນິວຄລີອິກ, ລາຍການກວດຫາຕໍ່ໄປນີ້ໄດ້ຖືກສະເຫນີ,

“E” ຊີ້ບອກເຖິງຂໍ້ມູນທີ່ຕ້ອງໄດ້ສະໜອງໃຫ້ ແລະ “D” ຊີ້ບອກເຖິງຂໍ້ມູນທີ່ຄວນຈະໃຫ້ຖ້າຈຳເປັນ.

ແບບຟອມແມ່ນສັບສົນຫຼາຍ, ໃນຄວາມເປັນຈິງ, ຂ້ອຍຕ້ອງການເວົ້າວ່າທຸກຄົນຕ້ອງເລີ່ມຕົ້ນຈາກ

ຄວາມບໍລິສຸດ (D), ຜົນຜະລິດ (D), ຄວາມສົມບູນ (E) ແລະຄວາມສອດຄ່ອງ (E) ເພື່ອປະເມີນອາຊິດ Nucleic ໃນສີ່ດ້ານນີ້.

ອີງຕາມນິໄສຂອງການທົດລອງ, ທໍາອິດໃຫ້ເວົ້າກ່ຽວກັບວິທີການປະເມີນຜົນຂອງຄວາມບໍລິສຸດແລະຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນ.

ການວັດແທກ OD ແມ່ນວິທີການກວດຫາທີ່ມັກ ແລະງ່າຍທີ່ສຸດສຳລັບນັກທົດລອງ.ສໍາລັບຫຼັກການ, ຂ້າພະເຈົ້າຈະບໍ່ເຂົ້າໄປໃນລາຍລະອຽດທີ່ນີ້.ຫ້ອງທົດລອງຈໍານວນຫຼາຍໃນປັດຈຸບັນໃຊ້ ultra-micro spectrophotometers ເພື່ອວິເຄາະປະລິມານໂດຍກົງຂອງອາຊິດ nucleic.ໃນຂະນະທີ່ສະແດງຄ່າການດູດຊຶມ, ໂຄງການໂດຍກົງໃຫ້ຄ່າຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນ (ອາຊິດ nucleic, ທາດໂປຼຕີນແລະສີຍ້ອມ fluorescent) ແລະອັດຕາສ່ວນທີ່ກ່ຽວຂ້ອງ.ສໍາລັບການວິເຄາະຂອງມູນຄ່າ OD, Save ຮູບນີ້ແລະທ່ານຈະດີ.

ບັນຊີລາຍຊື່ການແກ້ໄຂມູນຄ່າ OD ທົ່ວໄປ

ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ມີຂໍ້ຄວນລະວັງບາງຢ່າງທີ່ຈໍາເປັນຕ້ອງໄດ້ນໍາເອົາອອກແຍກຕ່າງຫາກສໍາລັບທ່ານ.

(ຫຼັງ​ຈາກ​ນັ້ນ​ທັງ​ຫມົດ​, ຂ້າ​ພະ​ເຈົ້າ​ຮູ້​ວ່າ​ທ່ານ​ຕ້ອງ​ເປັນ​ຜູ້​ທີ່​ຊ່ວຍ​ປະ​ຢັດ​ແລະ​ລໍ​ຖ້າ​ຈົນ​ກວ່າ​ທ່ານ​ຕ້ອງ​ການ​ມັນ​!)

ຫມາຍເຫດ 1 ອຸປະກອນ

ມູນຄ່າ OD ຈະໄດ້ຮັບຜົນກະທົບຈາກອຸປະກອນທີ່ແຕກຕ່າງກັນ.ຕາບໃດທີ່ OD260 ຢູ່ໃນຂອບເຂດທີ່ແນ່ນອນ, ຄ່າຂອງ OD230 ແລະ OD280 ແມ່ນມີຄວາມຫມາຍ.ຕົວຢ່າງ, ຊ່ວງການດູດຊຶມຂອງ Eppendorf D30 ທົ່ວໄປຢູ່ທີ່ 260nm ແມ່ນ 0 ~ 3A, ແລະ NanoDrop One ຂອງ Thermo ແມ່ນຢູ່ທີ່ 260nm.ລະດັບການດູດຊຶມຂອງ 0.5 ~ 62.5A.

ໝາຍເຫດ 2ທາດເຈືອຈາງ

ມູນຄ່າ OD ສາມາດໄດ້ຮັບຜົນກະທົບຈາກການເຈືອຈາງຂອງທາດປະສົມທີ່ແຕກຕ່າງກັນ.ຕົວຢ່າງ, ການອ່ານ OD260/280 ຂອງ RNA ບໍລິສຸດໃນ pH7.5 10ມມ Trisbuffer ແມ່ນຢູ່ລະຫວ່າງ 1.9-2.1, ໃນຂະນະທີ່ຢູ່ໃນການແກ້ໄຂນ້ໍາທີ່ເປັນກາງອັດ​ຕາ​ສ່ວນ​ຈະ​ຕ​່​ໍ​າ​, ບາງ​ທີ​ພຽງ​ແຕ່ 1.8-2.0​, ແຕ່​ນີ້​ບໍ່​ໄດ້​ຫມາຍ​ຄວາມ​ວ່າ​ຄຸນ​ນະ​ພາບ​ຂອງ RNA ການ​ປ່ຽນ​ແປງ​ທີ່​ແຕກ​ຕ່າງ​ກັນ​.

ໝາຍເຫດ 3ສານຕົກຄ້າງ

ການມີຢູ່ຂອງສານທີ່ຕົກຄ້າງຈະສົ່ງຜົນກະທົບຕໍ່ຄວາມຖືກຕ້ອງຂອງການວັດແທກຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງອາຊິດ nucleic, ດັ່ງນັ້ນ, ມັນຈໍາເປັນຕ້ອງຫຼີກເວັ້ນທາດໂປຼຕີນ, phenol, polysaccharide ແລະ polyphenol ທີ່ຕົກຄ້າງຢູ່ໃນຕົວຢ່າງອາຊິດນິວຄລີອິກເທົ່າທີ່ເປັນໄປໄດ້.

ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ໃນຄວາມເປັນຈິງ, ການສະກັດເອົາດ້ວຍທາດປະຕິກອນອິນຊີແມ່ນວິທີການເກົ່າແກ່.ໃນຊຸດການຄ້າ, ຜົນກະທົບຂອງການສະກັດເອົາສາມາດບັນລຸໄດ້ໂດຍຜ່ານຄໍລໍາ adsorption silica ປະສົມປະສານກັບການ centrifugation, ຫຼີກເວັ້ນການ reagents ສານພິດແລະເປັນອັນຕະລາຍທີ່ຍາກທີ່ຈະເອົາອອກ, ແລະອື່ນໆ ບັນຫາເຊັ່ນ:ຊຸດສະກັດອາຊິດນິວຄລີອິກຂອງ Foregene, ບໍ່ໃຊ້ DNase / RNase ແລະທາດປະສົມອິນຊີທີ່ເປັນພິດຕະຫຼອດການດໍາເນີນງານ, ໄວແລະປອດໄພ., ແລະຜົນກະທົບແມ່ນດີ(ບັງເອີນບອກວ່າມັນຫົວລ້ານ, ແຕ່ຂ້ອຍຮູ້ວ່າເຈົ້າຢາກຮູ້).

ຕົວຢ່າງ 1: ການສະກັດເອົາ DNA ພັນທຸ ກຳ ຜົນຜະລິດແລະຄວາມບໍລິສຸດ

Foregene Soil DNA Isolation Kit (DE-05511) ປະຕິບັດຕໍ່ຕົວຢ່າງດິນຈາກແຫຼ່ງຕ່າງໆ, ແລະປະລິມານແລະຄວາມບໍລິສຸດຂອງ DNA genomic ທີ່ໄດ້ຮັບແມ່ນສະແດງຢູ່ໃນຕາຕະລາງຕໍ່ໄປນີ້:
ຕົວຢ່າງ 2: ຜົນຜະລິດການສະກັດເອົາເນື້ອເຍື່ອ RNA ແລະຄວາມບໍລິສຸດ

Animal Total RNA Isolation Kit (RE-03012) ປຸງແຕ່ງຕົວຢ່າງເນື້ອເຍື່ອຕ່າງໆ, ແລະປະລິມານແລະຄວາມບໍລິສຸດຂອງ RNA ທີ່ໄດ້ຮັບແມ່ນສະແດງຢູ່ໃນຕາຕະລາງຂ້າງລຸ່ມນີ້ (ສໍາລັບເນື້ອເຍື່ອຫນູ):
ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ຢ່າຄິດວ່າທ່ານກໍາລັງເຮັດດ້ວຍຄ່າ OD.ເຈົ້າມີການດູແລຈຸດສໍາຄັນທີ່ຂ້ອຍແຕ້ມໃຫ້ທ່ານຢູ່ທາງຫນ້າບໍ?

ແຈ້ງການ

ໂມເລກຸນອາຊິດນິວຄລີອິກທີ່ແຕກແຍກຈະຖືກຄິດໄລ່ໃນການດູດຊຶມ.ສົມມຸດວ່າທ່ານມີສານຕົກຄ້າງ DNA genomic ໃນ RNA, ຄ່າ OD ຂອງທ່ານຈະປາກົດວ່າສູງຫຼາຍ, ແຕ່ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນທີ່ແທ້ຈິງຂອງ RNA ບໍ່ສາມາດກໍານົດໄດ້.ບໍ່ວ່າ RNA ຂອງເຈົ້າແມ່ນບໍ່ຈະແຈ້ງວ່າມັນມີການເຊື່ອມໂຊມຫຼືບໍ່, ດັ່ງນັ້ນພວກເຮົາຍັງຕ້ອງການວິທີການປະເມີນຜົນທີ່ສົມບູນແບບເພື່ອໃຫ້ຄໍາຕັດສິນທີ່ຖືກຕ້ອງກວ່າ, ນັ້ນແມ່ນ, ການປະເມີນຄວາມສົມບູນຂອງອາຊິດນິວເຄຼຍທີ່ໄດ້ກ່າວມາໃນ MIQE.