ຂ້ອຍເຊື່ອວ່າທຸກຄົນຈະພົບບັນຫາດັ່ງກ່າວ ຫຼືບັນຫາດັ່ງກ່າວສະເໝີເມື່ອເຮັດປະຕິກິລິຍາ PCR, ແຕ່ພວກມັນສ່ວນໃຫຍ່ສາມາດແບ່ງອອກເປັນສອງບັນຫາຕົ້ນຕໍຄື:

ການຂະຫຍາຍຕົວແບບ gene ໜ້ອຍເກີນໄປ (ການຂະຫຍາຍພັນ);
ການຂະຫຍາຍພັນທຸກໍາທີ່ບໍ່ເປັນເປົ້າໝາຍຫຼາຍເກີນໄປ.
ການນໍາໃຊ້ສານເຕີມແຕ່ງແມ່ນຫນຶ່ງໃນຍຸດທະສາດທົ່ວໄປເພື່ອແກ້ໄຂບັນຫາເຫຼົ່ານີ້.ປົກກະຕິແລ້ວບົດບາດຂອງສານເສີມມີສອງດ້ານ:
ໂຄງ​ປະ​ກອບ​ການ​ຮອງ​ຂອງ genes (ໂຄງສ້າງຮອງ);
ຫຼຸດການໃສ່ພື້ນຜິວທີ່ບໍ່ສະເພາະ.
ມື້ນີ້, ບັນນາທິການຈະແນະນໍາທ່ານໂດຍຫຍໍ້ກ່ຽວກັບສານເສີມທົ່ວໄປໃນປະຕິກິລິຍາ PCR ແລະຫນ້າທີ່ຂອງມັນ.
ສານເຕີມແຕ່ງທີ່ຫຼຸດຜ່ອນໂຄງສ້າງຂັ້ນສອງ
sulfoxide(DMSO)
ຕົວຢ່າງ geneມີເນື້ອໃນ GC ສູງ.ຢ່າງໃດກໍ່ຕາມ, DMSO ຍັງຫຼຸດຜ່ອນກິດຈະກໍາ Taq polymerase ຢ່າງຫຼວງຫຼາຍ.ດັ່ງນັ້ນ, ທຸກຄົນຕ້ອງດຸ່ນດ່ຽງການເຂົ້າເຖິງຂອງແມ່ແບບແລະກິດຈະກໍາຂອງໂພລີເມີເຣດ.ບັນນາທິການແນະນໍາວ່າທ່ານສາມາດລອງຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ DSMO ທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ເຊັ່ນ: ຈາກ 2% ຫາ 10%, ເພື່ອຊອກຫາຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນທີ່ເຫມາະສົມກັບການທົດລອງຂອງທ່ານ.
ຜົງຊັກຟອກທີ່ບໍ່ມີທາດໄອອອນ
ຜົງຊັກຟອກທີ່ບໍ່ມີທາດໄອອອນ, ເຊັ່ນ: 0.1-1% Triton X-100, Tween 20 ຫຼື NP-40, ປົກກະຕິແລ້ວຈະຫຼຸດຜ່ອນໂຄງສ້າງຂັ້ນສອງຂອງ DNA.ເຖິງແມ່ນວ່ານີ້ສາມາດເພີ່ມການຂະຫຍາຍພັນທຸກໍາຂອງແມ່ແບບ, ມັນຍັງເຮັດໃຫ້ເກີດບັນຫາຂອງການຂະຫຍາຍທີ່ບໍ່ສະເພາະ.ດັ່ງນັ້ນ, ສານເສີມເຫຼົ່ານີ້ເຮັດວຽກໄດ້ດີສໍາລັບປະຕິກິລິຍາ PCR ທີ່ມີຜົນຜະລິດຕ່ໍາໂດຍບໍ່ມີສິ່ງເສດເຫຼືອ, ແຕ່ບໍ່ດີສໍາລັບປະຕິກິລິຍາ PRC ທີ່ຂ້ອນຂ້າງບໍ່ສະອາດ.ຜົນປະໂຫຍດອີກອັນຫນຶ່ງຂອງເຄື່ອງຊັກຜ້າທີ່ບໍ່ມີທາດ ionic ແມ່ນການຫຼຸດຜ່ອນການປົນເປື້ອນ SDS.ປົກກະຕິແລ້ວໃນລະຫວ່າງຂະບວນການສະກັດເອົາ DNA, SDS ຈະຖືກນໍາໄປສູ່ຂັ້ນຕອນ PCR, ເຊິ່ງຂັດຂວາງກິດຈະກໍາຂອງໂພລີເມີເຣດຢ່າງຫຼວງຫຼາຍ.ດັ່ງນັ້ນ, ການເພີ່ມ 0.5% Tween-20 ຫຼື Tween-40 ກັບປະຕິກິລິຍາສາມາດ neutralize ຜົນກະທົບທາງລົບຂອງ SDS.
Betaine_
Betaine ສາມາດປັບປຸງການຂະຫຍາຍ DNA ໂດຍການຫຼຸດຜ່ອນການສ້າງໂຄງສ້າງຂັ້ນສອງແລະໂດຍທົ່ວໄປແລ້ວເປັນ "ຄວາມລຶກລັບ" ຕໍ່ກັບຊຸດ PCR ການຄ້າ.ຖ້າທ່ານຕ້ອງການໃຊ້ betaine, ທ່ານຄວນໃສ່ betaine ຫຼື betaine mono-hydrate (Betaine ຫຼື Betaine mono-hydrate), ແຕ່ບໍ່ແມ່ນ betaine hydrochloride (Betaine HCl), ປັບຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນສຸດທ້າຍຂອງ 1-1.7M.Betaine ຍັງສາມາດຊ່ວຍປັບປຸງຄວາມສະເພາະເພາະມັນກໍາຈັດການເອື່ອຍອີງອົງປະກອບຂອງຄູ່ພື້ນຖານຂອງການລະລາຍ DNA / DNA denaturation.
ສານເຕີມແຕ່ງເພື່ອຫຼຸດຜ່ອນການ priming ທີ່ບໍ່ສະເພາະ
Formamide
Formamide ແມ່ນສານເສີມ PCR ທີ່ໃຊ້ທົ່ວໄປທົ່ວໄປ.ມັນ​ສາ​ມາດ​ປະ​ສົມ​ກັບ​ຮ່ອງ​ທີ່​ສໍາ​ຄັນ​ແລະ​ຮ່ອງ​ການ​ຄ້າ​ຫນ້ອຍ​ໃນ DNA​, ເຮັດ​ໃຫ້​ການ​ຫຼຸດ​ຜ່ອນ​ຄວາມ​ສະ​ຖຽນ​ລະ​ພາບ​ຂອງ master DNA double helix ແລະ​ຫຼຸດ​ຜ່ອນ​ອຸນ​ຫະ​ພູມ​ການ​ລະ​ລາຍ​ຂອງ DNA​.ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ formamide ທີ່ໃຊ້ໃນການທົດລອງ PCR ປົກກະຕິແລ້ວແມ່ນ 1%-5%.
ເຕຕຣາເມໂທນammonium chloride( TMAC)
Tetramethylammonium chloride ສາມາດເພີ່ມຄວາມສະເພາະຂອງການປະສົມ (ຄວາມສະເພາະຂອງການປະສົມ) ແລະເພີ່ມອຸນຫະພູມ melting ຂອງ DNA.ດັ່ງນັ້ນ, TMAC ສາມາດເອົາ priming ທີ່ບໍ່ສະເພາະແລະຫຼຸດຜ່ອນການຜູກມັດຂອງ DNA ແລະ RNA ທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງ.ຖ້າທ່ານໃຊ້degenerate primersໃນປະຕິກິລິຍາ PCR, ຈື່ຈໍາທີ່ຈະເພີ່ມ TMAC, ເຊິ່ງຖືກນໍາໃຊ້ທົ່ວໄປໃນຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ 15-100mM.
ສານເສບຕິດທົ່ວໄປອື່ນໆ
ນອກເຫນືອໄປຈາກສອງປະເພດຂອງສານເຕີມແຕ່ງທີ່ໄດ້ກ່າວມາຂ້າງເທິງ, ມີສານເພີ່ມທົ່ວໄປຫຼາຍໃນປະຕິກິລິຍາ PCR, ເຖິງແມ່ນວ່າພວກມັນມີຫນ້າທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ພວກມັນຍັງມີຄວາມສໍາຄັນຫຼາຍ.
ແມກນີຊຽມ ion
Magnesium ion ແມ່ນ cofactor (cofactor) ທີ່ຂາດບໍ່ໄດ້ຂອງ polymerase, ນັ້ນແມ່ນ, ໂດຍບໍ່ມີ magnesium ion, polymerase ແມ່ນບໍ່ມີການເຄື່ອນໄຫວ.ຢ່າງໃດກໍຕາມ, magnesium ions ຫຼາຍເກີນໄປຍັງສາມາດສົ່ງຜົນກະທົບຕໍ່ປະສິດທິພາບຂອງ polymerase ໄດ້.ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ magnesium ions ໃນແຕ່ລະປະຕິກິລິຍາ PCR ຈະແຕກຕ່າງກັນ.ຕົວແທນ Chelating (ເຊັ່ນ EDTA ຫຼື citrate), ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ dNTPs ແລະທາດໂປຼຕີນທັງຫມົດມີຜົນກະທົບຕໍ່ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ magnesium ions.ດັ່ງນັ້ນ, ຖ້າທ່ານມີບັນຫາກັບການທົດລອງ PCR ຂອງທ່ານ, ທ່ານສາມາດພະຍາຍາມປ່ຽນຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ magnesium ion ທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ສໍາລັບການຍົກຕົວຢ່າງ, ຈາກ 1.0 ຫາ 4.0mM, ໂດຍມີໄລຍະຫ່າງລະຫວ່າງ 0.5-1mM.
ມັນເປັນມູນຄ່າທີ່ສັງເກດວ່າຫຼາຍຮອບວຽນ freeze-thaw ສາມາດນໍາໄປສູ່ການ stratification ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງການແກ້ໄຂ magnesium chloride.ສະນັ້ນ, ເຈົ້າຕ້ອງລະລາຍມັນໃຫ້ໝົດກ່ອນນຳໃຊ້ແຕ່ລະຄັ້ງ, ແລະ ປະສົມໃຫ້ເຂົ້າກັນດີກ່ອນນຳໃຊ້.
albumin ເຊຣັມ ບີ(Bovine albumin, BSA)
ໃນການທົດລອງເຄມີໂມເລກຸນ, albumin serum bovine ແມ່ນສານເຕີມເຕັມທີ່ພົບເລື້ອຍ, ໂດຍສະເພາະໃນການຍ່ອຍອາຫານຂອງເອນໄຊທີ່ຈໍາກັດແລະການທົດລອງ PCR.ໃນປະຕິກິລິຍາ PCR, BSA ມີປະໂຫຍດໃນການຫຼຸດຜ່ອນການປົນເປື້ອນເຊັ່ນ: ທາດປະສົມ phenolic.ແລະມັນຍັງເວົ້າວ່າມັນສາມາດຫຼຸດຜ່ອນການຍຶດຕິດຂອງ reactants ກັບກໍາແພງຂອງທໍ່ທົດສອບ.ໃນປະຕິກິລິຍາ PCR, ປົກກະຕິແລ້ວຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ BSA ເພີ່ມສາມາດບັນລຸ 0.8 mg / ml.
 
ຜະ​ລິດ​ຕະ​ພັນ​ທີ່​ກ່ຽວ​ຂ້ອງ:
PCR Hero(ມີສີຍ້ອມ)
PCR Hero