ຜູ້ຂຽນ: Wang Xiaoyan, Zhao Eryu

ຫນ່ວຍ​ງານ​: ໂຮງ​ຫມໍ Jiaozhou​, ໂຮງ​ຫມໍ Dongfang ທີ່​ກ່ຽວ​ຂ້ອງ​ກັບ​ວິ​ທະ​ຍາ​ໄລ Tongji​

ໃນປັດຈຸບັນ, ປະເພດຕົວຢ່າງຕົ້ນຕໍສໍາລັບການກວດພົບອາຊິດນິວຄລີອິກຂອງເຊື້ອພະຍາດທາງເດີນຫາຍໃຈແມ່ນ swab ຄໍ.ມີຫຼາຍປະເພດຂອງວິທີແກ້ໄຂການເກັບຮັກສາຕົວຢ່າງທີ່ໃຊ້ທົ່ວໄປ, ທັງຫມົດນີ້ຈໍາເປັນຕ້ອງໄດ້ຕູ້ເຢັນຫຼື frozen ສໍາລັບການຂົນສົ່ງແລະການເກັບຮັກສາ;ມັນເປັນການຍາກທີ່ຈະຄວບຄຸມຂະບວນການທັງຫມົດຂອງອຸນຫະພູມຕ່ໍາໃນລະຫວ່າງຂະບວນການເກັບກໍາແລະການຂົນສົ່ງ, ແລະມັນເປັນການຍາກທີ່ຈະຮັບປະກັນການຄວບຄຸມຄຸນນະພາບກ່ອນທີ່ຈະທົດສອບຕົວຢ່າງ.^[1-2].

RNase (RNase) ແມ່ນ endonuclease ທີ່ hydrolyzes RNA, ສ່ວນໃຫຍ່ແມ່ນຕັດພັນທະບັດ phosphodiester ລະຫວ່າງ nucleotides.ໂມເລກຸນ RNase ມີຄວາມຫມັ້ນຄົງຫຼາຍ, ມີພັນທະບັດ disulfide ໃນໂຄງສ້າງ, ແລະກິດຈະກໍາຂອງມັນບໍ່ໄດ້ຮຽກຮ້ອງໃຫ້ມີການປະກົດຕົວຂອງ cations divalent, ສະນັ້ນ RNase ແມ່ນບໍ່ເປັນ denatured ງ່າຍ, ແລະມັນງ່າຍທີ່ຈະ renature ເຖິງແມ່ນວ່າຫຼັງຈາກອຸນຫະພູມສູງຫຼືການນໍາໃຊ້ຂອງ denaturants.RNases ຖືກແບ່ງອອກເປັນ endogenous ແລະ exogenous.RNases endogenous ສາມາດຖືກປ່ອຍອອກມາໃນເວລາດຽວກັນໃນເວລາທີ່ຈຸລັງຖືກ ruptured.ດັ່ງນັ້ນ, ການກໍາຈັດບົດບາດຂອງ RNases endogenous ແມ່ນຂັ້ນຕອນທີ່ສໍາຄັນຫຼາຍໃນຂະບວນການສະກັດເອົາ RNA.Exogenous RNases ຖືກແຈກຢາຍຢ່າງກວ້າງຂວາງ.RNases ມີຢູ່ໃນອາກາດ, ຜິວຫນັງຂອງມະນຸດ, ຜົມແລະນໍ້າລາຍ, ເຊິ່ງເປັນເຫດຜົນສໍາຄັນສໍາລັບການຍ່ອຍສະຫຼາຍຂອງ RNA ງ່າຍ.^[3].

ການສອບຖາມຂໍ້ມູນ

CANS-CL02-A009 "ຄໍາຮ້ອງສະຫມັກຂອງຄູ່ມືການຢັ້ງຢືນຄຸນນະພາບແລະຄວາມສາມາດຂອງຫ້ອງທົດລອງທາງການແພດໃນຂົງເຂດການວິນິດໄສໂມເລກຸນ" ໃນຂໍ້ກໍານົດດ້ານວິຊາການສະເຫນີວ່າມາດຕະຖານຄຸນນະພາບນ້ໍາທີ່ເຫມາະສົມຄວນໄດ້ຮັບການສ້າງຂື້ນຕາມຄໍາຮ້ອງສະຫມັກ;ຕູ້ຄອນເທນເນີ airtight ຖິ້ມໄດ້:

RNase/ການຈັດປະເພດ

(1) RNase A

Ribonuclease A (RNase A), ທີ່ມາຈາກ pancreas bovine, ແມ່ນ endoribonuclease ທີ່ສາມາດໂຈມຕີ 3′ ໃນຕອນທ້າຍຂອງ pyrimidine residues ໃນ RNA, ຕັດ cytosine ຫຼື uracil ສ້າງຕັ້ງຂຶ້ນໂດຍ nucleotides ທີ່ຢູ່ໃກ້ຄຽງ.ພັນທະບັດ Phosphodiester, ຜະລິດຕະພັນສຸດທ້າຍຂອງປະຕິກິລິຍາແມ່ນ 3′ pyrimidine nucleotide ແລະ oligonucleotide ທີ່ມີ 3′ pyrimidine nucleotide ໃນຕອນທ້າຍຂອງ.

(2) RNase T1

Ribonuclease T1 (RNase T1) ແມ່ນໄດ້ມາຈາກ Aspergillus orjzae, ມັນປະຕິບັດໂດຍສະເພາະກ່ຽວກັບ 3′-terminal phosphate ຂອງ guanine, ແລະສະຖານທີ່ cleavage ແມ່ນລະຫວ່າງ 3′ phosphate ຂອງ guanine ແລະ 5′ hydroxyl ຂອງ nucleotides ທີ່ຢູ່ໃກ້ຄຽງ.ຜະລິດຕະພັນສຸດທ້າຍຂອງປະຕິກິລິຍາແມ່ນ 3′ອາຊິດ guanylic ແລະຊິ້ນ oligonucleotide ກັບ 3′ອາຊິດ guanylic ໃນຕອນທ້າຍຂອງ.

(3) RNase H

Ribonuclease H (RNase H) ຖືກຄົ້ນພົບຄັ້ງທໍາອິດຈາກເນື້ອເຍື່ອ thymus calf, ແລະ gene ການເຂົ້າລະຫັດຂອງມັນໄດ້ຖືກໂຄນເຂົ້າໄປໃນ Escherichia coli.ມັນສາມາດທໍາລາຍ DNA ໂດຍສະເພາະ: ສາຍ RNA ໃນຄູ່ປະສົມ RNA, ສົ່ງຜົນໃຫ້ oligonucleotides ແລະ mononucleotides ມີ 3′-OH ແລະ 5′-monophosphate ສິ້ນສຸດລົງ, ມັນບໍ່ສາມາດທໍາລາຍ DNA ຫຼື RNA ດຽວຫຼືສອງສາຍ.

RNase

ຟັງຊັນແລະການນໍາໃຊ້

Ribonuclease ສາມາດກະຕຸ້ນການເຊື່ອມໂຊມຂອງອາຊິດ ribonucleic (RNA) ແລະສາມາດສັງເຄາະທຽມ.ຢາຂີ້ເຜິ້ງເປັນຢາຖືກ ນຳ ໃຊ້ເພື່ອປິ່ນປົວບາດແຜແລະອາການເຈັບຂໍ້ກະດູກ.ອີງຕາມບົດລາຍງານ, ribonuclease ສາມາດປ່ຽນແປງການເຜົາຜະຫລານຂອງເຊນເຈົ້າພາບ, ຍັບຍັ້ງການສັງເຄາະເຊື້ອໄວຣັສ, ຍັບຍັ້ງການຂະຫຍາຍພັນຂອງເຊື້ອໄວຣັສໄຂ້ຫວັດໃຫຍ່ໃນ vitro, ແລະຍັບຍັ້ງການສ້າງຕັ້ງຂອງວັກຊີນແລະເຊື້ອໄວຣັສ herpes ໃນ embryos ໄກ່.ການນໍາໃຊ້ທາງຄລີນິກຂອງ ribonuclease ສັກຢາ intramuscular ປະຈໍາວັນຂອງ 180 ມລກ, ເປັນປະໂຍດໃນການປິ່ນປົວໂຣກ encephalitis ລະບາດ, ribonuclease ສາມາດ catalyze ການເຊື່ອມໂຊມຂອງອາຊິດ ribonucleic (RNA), ແລະໃນປັດຈຸບັນສາມາດໄດ້ຮັບການສັງເຄາະປອມ.ຢາຂີ້ເຜິ້ງເປັນຢາຖືກ ນຳ ໃຊ້ເພື່ອປິ່ນປົວບາດແຜແລະອາການເຈັບຂໍ້ກະດູກ.ອີງຕາມບົດລາຍງານ, ribonuclease ສາມາດປ່ຽນແປງການເຜົາຜະຫລານຂອງເຊນເຈົ້າພາບ, ຍັບຍັ້ງການສັງເຄາະເຊື້ອໄວຣັສ, ຍັບຍັ້ງການຂະຫຍາຍພັນຂອງເຊື້ອໄວຣັສໄຂ້ຫວັດໃຫຍ່ໃນ vitro, ແລະຍັບຍັ້ງການສ້າງຕັ້ງຂອງວັກຊີນແລະເຊື້ອໄວຣັສ herpes ໃນ embryos ໄກ່.ການນໍາໃຊ້ທາງຄລີນິກຂອງການສັກຢາ ribonuclease ປະຈໍາວັນຂອງ 180 mg ແມ່ນເປັນປະໂຫຍດສໍາລັບການປິ່ນປົວໂຣກ encephalitis ລະບາດ.

RNase

ຄໍານິຍາມ inhibitor

ຄໍານິຍາມຂອງຫນ່ວຍຍັບຍັ້ງ RNase: ຈໍານວນ enzyme ທີ່ຕ້ອງການເພື່ອຍັບຍັ້ງ 50% ຂອງກິດຈະກໍາຂອງ 5ng RNase A ແມ່ນຫນຶ່ງຫນ່ວຍ.

ວິທີການ RNase inhibitors ເຮັດວຽກ

Guanidine isothiocyanate:

Guanidine isothiocyanate ແມ່ນສານປະກອບອິນຊີທີ່ມີສູດໂມເລກຸນ C2H6N4S.ຕົ້ນຕໍແມ່ນໃຊ້ໃນຢາຊີວະພາບ, ສານເຄມີ reagents, ແລະອື່ນໆ Guanidine isothiocyanate ເປັນທາດໂປຼຕີນຈາກ lysing ຕົວແທນ, ແລະມັນມັກຈະຖືກນໍາໃຊ້ເປັນອົງປະກອບຕົ້ນຕໍຂອງການແກ້ໄຂ lysis ໃນ reagents ການວິນິດໄສໂມເລກຸນ.ມັນສາມາດ lyse ເນື້ອເຍື່ອ, ທໍາລາຍໂຄງສ້າງຂອງເຊນແລະ dissociate ອາຊິດ nucleic ຈາກ nucleoprotein, ແລະມີ denaturation ທີ່ເຂັ້ມແຂງກັບ RNase.ມັນເປັນຕົວຍັບຍັ້ງ RNase ທີ່ມີປະສິດທິຜົນທີ່ສຸດໃນປະຈຸບັນ.

TRIzol ແມ່ນສານສະກັດຈາກ RNA ທັງໝົດທີ່ສາມາດສະກັດເອົາ RNA ທັງໝົດອອກຈາກຈຸລັງ ຫຼືເນື້ອເຍື່ອໄດ້ໂດຍກົງ.ມັນປະກອບດ້ວຍສານເຊັ່ນ phenol ແລະ guanidine isothiocyanate, ເຊິ່ງສາມາດທໍາລາຍຈຸລັງຢ່າງໄວວາແລະຍັບຍັ້ງ nucleases ທີ່ປ່ອຍອອກມາໂດຍຈຸລັງ.

(ຢ່າງໃດກໍຕາມ, guanidine isothiocyanate ເປັນອັນຕະລາຍຕໍ່ສຸຂະພາບຂອງນັກຄົ້ນຄວ້າຫ້ອງທົດລອງ.)

RNasin:

ອາຊິດ glycoprotein ທີ່ສະກັດຈາກຕັບຫນູຫຼື blastoderm ຂອງມະນຸດ.Rnasin ແມ່ນຕົວຍັບຍັ້ງທີ່ບໍ່ມີການແຂ່ງຂັນຂອງ RNase, ເຊິ່ງສາມາດຜູກມັດກັບ RNases ຕ່າງໆເພື່ອ inactivate ພວກມັນ.

(ລາຍລະອຽດເພີ່ມເຕີມ: https://www.foreivd.com/foreasy-rnase-inhibitor-product/)

Hອຸນ​ຫະ​ພູມ​ສູງ​:

ອຸນ​ຫະ​ພູມ​ສູງ​ຍັງ​ເປັນ​ວິ​ທີ​ການ​ທົ່ວ​ໄປ​ຂອງ​ການ denaturation ທາດ​ໂປຼ​ຕີນ​.

Diethylpyrocarbonate (DEPC):

DEPC ແມ່ນຕົວຍັບຍັ້ງ RNase ທີ່ເຂັ້ມແຂງແຕ່ບໍ່ຄົບຖ້ວນ, ເຊິ່ງສາມາດຍັບຍັ້ງກິດຈະກໍາ RNase ໂດຍການສົມທົບກັບອາຊິດ amino acid imidazole ring ຂອງກຸ່ມ RNase active ກັບທາດໂປຼຕີນຈາກ denature.

ສະລັບສັບຊ້ອນ Vanadyl ribonucleoside:

ສະລັບສັບຊ້ອນທີ່ສ້າງຂຶ້ນໂດຍ ions vanadium oxide ແລະ nucleosides, ເຊິ່ງຜູກມັດກັບ RNase ໃນຮູບແບບຂອງສານປ່ຽນ, ເຊິ່ງເກືອບທັງຫມົດສາມາດຍັບຍັ້ງກິດຈະກໍາຂອງ RNase.

ອື່ນໆ:

SDS, urea, diatomaceous earth, ແລະອື່ນໆຍັງມີຜົນກະທົບ inhibitory ທີ່ແນ່ນອນກ່ຽວກັບ RNase.

ການທົບທວນຄືນຂອງຜູ້ຊ່ຽວຊານ

ນາຍຊ່າງ Li Yujie

ຜູ້​ອໍາ​ນວຍ​ການ​ຫ້ອງ​ທົດ​ລອງ​, ໂຮງ​ຫມໍ Jiaozhou​, ໂຮງ​ຫມໍ Dongfang ທີ່​ກ່ຽວ​ຂ້ອງ​ກັບ​ວິ​ທະ​ຍາ​ໄລ Tongji​

ເພື່ອປ້ອງກັນການຍ່ອຍສະຫຼາຍທາງຊີວະພາບຂອງ RNase exogenous, ຫນ້າກາກ, ຖົງມືແລະຫມວກຄວນໄດ້ຮັບການໃສ່ແລະທົດແທນເລື້ອຍໆໃນລະຫວ່າງຂະບວນການສະກັດເອົາ RNA.ເຄື່ອງແກ້ວທັງໝົດຕ້ອງຖືກອົບໃນເຕົາອົບທີ່ອຸນຫະພູມ 200 ອົງສາເຊ ເປັນເວລາຫຼາຍກວ່າ 2 ຊົ່ວໂມງ.ວັດສະດຸທີ່ໃຊ້ສໍາລັບການອົບ, ເຊັ່ນ: ພາດສະຕິກ, ຕ້ອງໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍນ້ໍາ DEPC, ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນລ້າງດ້ວຍນ້ໍາກັ່ນ.reagents ຫຼືອຸປະກອນທີ່ໃຊ້ສໍາລັບການສະກັດ, ຮັກສາແລະການກໍານົດຂອງ RNA ຄວນອຸທິດຕົນເພື່ອ RNA, ແລະພື້ນທີ່ປະຕິບັດງານ RNA ເອກະລາດຄວນໄດ້ຮັບການສ້າງຕັ້ງຂຶ້ນ.

ອ້າງອີງ:

[1] Smith-Vaughan HC, Binks MJ, Beissbarth J, et al.ເຊື້ອແບັກທີເຣັຍແລະໄວຣັສໃນ nasopharynx ທັນທີກ່ອນທີ່ຈະເລີ່ມຕົ້ນຂອງການຕິດເຊື້ອທາງເດີນຫາຍໃຈຕ່ໍາສ້ວຍແຫຼມໃນເດັກນ້ອຍພື້ນເມືອງອົດສະຕາລີ[J].Eur J Clin Microbiol Infect Dis,2018,37 (9): 1785-1794.

[2​] ໂຮງ​ຫມໍ​ສາ​ຂາ​ການ​ຄວບ​ຄຸມ​ການ​ຕິດ​ເຊື້ອ​ຂອງ​ສະ​ມາ​ຄົມ​ຢາ​ປ້ອງ​ກັນ​ຈີນ​.ແນວທາງການເກັບກຳ ແລະ ກວດກາຕົວຢ່າງຈຸລິນຊີທາງຄລີນິກ [J].ວາລະສານການຕິດເຊື້ອໂຮງໝໍຈີນ, 2018(20):3192-3200.

[3] "ການທົດສອບທາງຄລີນິກສິບພັນ ເປັນຫຍັງປະລິມານການທົດສອບຊີວະວິທະຍາໂມເລກຸນ"