ແນະນຳ:

RNA, ຊື່ວິທະຍາສາດ ribonucleic acid, ຕົວຫຍໍ້ຂອງມັນມາຈາກ RiboNucleic Acid, ແມ່ນປະເພດຂອງອາຊິດ nucleic ທີ່ສ້າງຂຶ້ນໂດຍການເຊື່ອມຕໍ່ຢ່າງຫນ້ອຍສິບຂອງ ribonucleotides ຜ່ານພັນທະບັດ phosphodiester.

ພື້ນຖານຂອງການຂຸດຄົ້ນ RNA ແມ່ນເພື່ອສະກັດເອົາ RNA ທີ່ບໍ່ມີມົນລະພິດ, ແລະຫຼັກການພື້ນຖານຂອງການຂຸດຄົ້ນ RNA ສາມາດສະຫຼຸບໄດ້ປະມານດັ່ງຕໍ່ໄປນີ້:

1. ທໍາລາຍຈຸລັງກ່ອນ

2. ຈາກນັ້ນກຳຈັດສິ່ງສົກກະປົກຂອງ macromolecular (ທາດໂປຼຕີນ, lipids, DNA, ແລະອື່ນໆ).

3. ສຸດທ້າຍ, RNA ຈະຖືກຕົກຄ້າງໃນຂະນະທີ່ກຳຈັດເກືອ ແລະສານລະລາຍອິນຊີ, ແລະເຮັດໃຫ້ RNA ບໍລິສຸດຕື່ມອີກ.

ວິທີການຂຸດຄົ້ນໃນອະດີດແລະປະຈຸບັນ

ວິທີການສະກັດເອົາ RNA ລຸ້ນທໍາອິດແມ່ນວິທີການ precipitation TRIzol (reagents ນໍາໃຊ້ປະກອບມີ guanidine isothiocyanate, phenol, chloroform, ແລະອື່ນໆ) ປະດິດໂດຍພໍ່ຕູ້ທີ່ມີຊື່ວ່າ Piotr Chomczynski ແລະແມ່ຕູ້ Nicoletta Sacchi, ເນື່ອງຈາກວ່າ invention ນີ້ອະນຸຍາດໃຫ້ສະກັດ RNA ໄດ້ໄວແລະງ່າຍດາຍ, ນັບຕັ້ງແຕ່ຫຼັງຈາກນັ້ນການຄົ້ນຄວ້າ RNA ໄດ້ເລີ່ມຕົ້ນ.

ຕໍ່ມາ, ພໍ່ຕູ້ໄດ້ຂາຍສິດທິບັດນີ້ໃຫ້ Invitrogen, ແລະ Invitrogen ໄດ້ສົ່ງເສີມວິທີການນີ້ໄປທົ່ວໂລກ ແລະ ກາຍເປັນວິທີການທີ່ໃຊ້ກັນຢ່າງກວ້າງຂວາງ.

ຕໍ່ມາ, Invitrogen ໄດ້ມາໂດຍ Thermo!

ຜະລິດຕະພັນຕົວແທນ: Invitrogen's TRIzol reagent

ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ວິທີການ precipitation TRIzol ຮຽກຮ້ອງໃຫ້ມີ precipitation ຫຼາຍແລະການສະກັດເອົາ RNA, ແລະ reagents ທີ່ໃຊ້ແມ່ນເປັນພິດແລະໃຊ້ເວລາດົນໃນການດໍາເນີນງານ.

ດັ່ງນັ້ນ, ວິທີການຊໍາລະລ້າງຄໍລໍາ - enzyme ຮຸ່ນທີສອງໄດ້ກາຍເປັນ, ການນໍາໃຊ້ silica gel membrane ເປັນອຸປະກອນການດູດຊຶມອາຊິດ nucleic ສະເພາະເພື່ອເພີ່ມປະສິດທິພາບການຟື້ນຕົວຂອງ RNA ໃນຕົວຢ່າງໃນຂະນະທີ່ກໍາຈັດສິ່ງປົນເປື້ອນອື່ນໆ.

ວິທີການຮຸ່ນທີສອງເຮັດໃຫ້ການດໍາເນີນງານງ່າຍດາຍບົນພື້ນຖານຂອງການປະຕິບັດທີ່ຫມັ້ນຄົງ, ຫຼຸດຜ່ອນປັດໃຈຄວາມສ່ຽງ, ແລະປັບປຸງປະສິດທິພາບຂອງການສະກັດເອົາ RNA.

ຜະລິດຕະພັນຕົວແທນ: QIAGEN RNeasy ແລະຜະລິດຕະພັນພາຍໃນຫຼາຍທີ່ສຸດ

ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ທັງວິທີການຜະລິດຄັ້ງທໍາອິດແລະທີສອງຮຽກຮ້ອງໃຫ້ມີການນໍາໃຊ້ຂອງ DNase ເພື່ອກໍາຈັດການປົນເປື້ອນຂອງ DNA, ເຊິ່ງນໍາເອົາຄວາມບໍ່ສະດວກບາງຢ່າງໃຫ້ກັບການທົດລອງທາງລຸ່ມ.Residual DNase ຈະຫຼຸດຜ່ອນປະສິດທິພາບຂອງ reverse transcription ແລະຫຼຸດຜ່ອນການສັງເຄາະ cDNA ສາຍທໍາອິດ, ດັ່ງນັ້ນຜົນກະທົບຕໍ່ຄວາມຖືກຕ້ອງຂອງຜົນໄດ້ຮັບ.

ດັ່ງນັ້ນ, ວິທີການສະກັດເອົາການຜະລິດທີສາມແມ່ນ optimized ບົນພື້ນຖານຂອງການຜະລິດທີສອງ.ການທົດລອງບໍ່ຈໍາເປັນຕ້ອງເພີ່ມ enzymes ໃດໆ, ແລະ RNA ສາມາດໄດ້ຮັບໄດ້ຢ່າງງ່າຍດາຍໂດຍມີພຽງແຕ່ສອງຖັນ.

ຖັນທີ 1: ຖັນການທຳຄວາມສະອາດ DNA ເພື່ອລຶບລ້າງ DNA

ຖັນ 2: ຖັນສະເພາະ RNA ສະເພາະຕົວດູດຊຶມ ແລະຟື້ນຟູ RNA

ການດໍາເນີນງານງ່າຍດາຍດັ່ງກ່າວບໍ່ພຽງແຕ່ປະຫຍັດເວລາ, ແຕ່ຍັງສ້າງຄວາມສະດວກໃນການດໍາເນີນງານຂອງການທົດລອງລົງລຸ່ມ!

ຜະລິດຕະພັນຕົວແທນ: QIAGEN RNeasy Plus ແລະForegeneຜະລິດຕະພັນຊຸດການເຮັດຄວາມສະອາດ RNA

(RNeasy Plus)

(ຂອງ Foregeneຊຸດການແຍກ RNA ທັງໝົດຂອງພືດ)

ບອກຊື່ໆ!ຊຸດ RNA ຂອງ Foregene ຍັງນຳສະເໜີ RNase Eraser ທີ່ໃຊ້ງ່າຍສຸດໆ ເຊິ່ງສາມາດກຳຈັດ RNase 400μg ເທິງພື້ນຜິວແຂງໄດ້ພາຍໃນ 1 ນາທີ ໂດຍບໍ່ຕ້ອງເພີ່ມສານພິດໃດໆຕໍ່ຮ່າງກາຍຂອງມະນຸດ!

ຮູບ1: ຕາຕະລາງການປຽບທຽບຂະບວນການປະຕິບັດງານ

ຜະລິດຕະພັນຂອງ Foregene ສາມາດສະກັດ RNA ສໍາເລັດໃນພຽງແຕ່ສອງເພງ, ຢ່າເຮັດໃຫ້ຄົນອື່ນອິດສາກັບຄວາມຄືບຫນ້າຂອງການທົດລອງຂອງທ່ານ!

ຮູບ2:Eຜົນ​ໄດ້​ຮັບ xperimental​ ຕາຕະລາງການປຽບທຽບ

ຮຸ່ນທໍາອິດ (1: TRIzol)

ຮຸ່ນທີສອງ (2: RNeasy of QIAGEN)

ຮຸ່ນທີສາມ (3: QIAGEN's RNeasy plus, 4: Foregene)

ຮູບ3: ກຣາຟ qPCR (ກຣາຟໂຄ້ງການຂະຫຍາຍ)

ຮຸ່ນທໍາອິດ (ສີຂຽວຫມາຍຄວາມວ່າ TRIzol -, ສີແດງຫມາຍຄວາມວ່າ TRIzol +)

ຮຸ່ນທີສອງ (ສີຟ້າເຄົ້າຫມາຍຄວາມວ່າ QIAGEN RNeasy-, ສີແດງຫມາຍຄວາມວ່າ QIAGEN RNeasy +)

ຮຸ່ນທີສາມ (ສີຟ້າຫມາຍຄວາມວ່າ QIAGEN RNeasy plus, ສີຂຽວຫມາຍຄວາມວ່າ Foregene)

(ຫມາຍເຫດ: qPCR graph "-" ຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າ DNase ບໍ່ໄດ້ຖືກເພີ່ມແລະການປົນເປື້ອນ DNA ບໍ່ໄດ້ຖືກໂຍກຍ້າຍອອກ. ດັ່ງນັ້ນ, CT ສູງຂຶ້ນແລະຜົນໄດ້ຮັບບໍ່ຖືກຕ້ອງ; "+" ຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າ DNase ໄດ້ຖືກເພີ່ມແລະການປົນເປື້ອນ DNA ໄດ້ຖືກໂຍກຍ້າຍອອກ, ຜົນໄດ້ຮັບແມ່ນຖືກຕ້ອງ)

ທຸກໆການຍົກລະດັບດ້ານວິຊາການຫມາຍຄວາມວ່າການດໍາເນີນງານຂອງການທົດລອງກໍາລັງພັດທະນາໃນທິດທາງທີ່ງ່າຍດາຍແລະເປັນມິດກັບຜູ້ໃຊ້ຫຼາຍຂຶ້ນ.

Foregene ມີຈຸດປະສົງເພື່ອຊ່ວຍໃຫ້ນັກຄົ້ນຄວ້າວິທະຍາສາດຫຼາຍປະຫຍັດເວລາແລະຄ່າໃຊ້ຈ່າຍໃນການທົດລອງ, ໄດ້ຮັບຜົນການທົດລອງທີ່ມີຄຸນນະພາບສູງ, ແລະຮ່ວມກັນສ້າງຜົນສໍາເລັດການຄົ້ນຄວ້າວິທະຍາສາດທີ່ມີຄຸນຄ່າຫຼາຍຂຶ້ນ.