ການຖອດຂໍ້ຄວາມແບບດັ້ງເດີມບໍ່ສາມາດທົນທານຕໍ່ອຸນຫະພູມສູງໄດ້ (ອຸນຫະພູມທີ່ດີທີ່ສຸດສໍາລັບກິດຈະກໍາ MMLV ແມ່ນ 37-50 ° C, ແລະ AMV ແມ່ນ 42-60 ° C).RNA ໄວຣັສທີ່ສັບສົນຫຼາຍບໍ່ສາມາດຖືກສົ່ງຄືນຢ່າງມີປະສິດທິພາບເຂົ້າໄປໃນ cDNA ຢູ່ໃນອຸນຫະພູມຕ່ໍາ, ສົ່ງຜົນໃຫ້ປະສິດທິພາບການຊອກຄົ້ນຫາຫຼຸດລົງ.RT-qPCR ແບບດັ້ງເດີມໂດຍທົ່ວໄປຮຽກຮ້ອງໃຫ້ມີການມີສ່ວນຮ່ວມຂອງສອງ enzymes ທີ່ສໍາຄັນ (reverse transcriptase ແລະ DNA polymerase), ເຊິ່ງເຮັດໃຫ້ມັນເປັນໄປບໍ່ໄດ້ທີ່ຈະເຮັດຄວາມງ່າຍດາຍຂອງລະບົບປະຕິກິລິຍາແລະຫຼຸດຜ່ອນຄ່າໃຊ້ຈ່າຍ.ໃນທີ່ນີ້ພວກເຮົາຈະແນະນໍາສອງການຖອດຂໍ້ຄວາມແບບປີ້ນກັບກັນທີ່ທົນທານຕໍ່ອຸນຫະພູມສູງ, TtH ແລະ RevTaq.enzymes ສອງອັນນີ້ຍັງມີຫນ້າທີ່ຂອງ DNA polymerase, ດັ່ງນັ້ນພວກມັນຖືກເອີ້ນວ່າ enzymes bifunctional.
TtH DNA polymerase
ເຈົ້າຕ້ອງໄດ້ຍິນກ່ຽວກັບ TtH, ເຊິ່ງໄດ້ມາຈາກເຊື້ອແບັກທີເຣັຍ thermophilic Thermus thermophilus HB8.ໃນທີ່ປະທັບຂອງ cations divalent ເຊັ່ນ Mg2+, ມັນມີກິດຈະກໍາ DNA polymerase.ມັນຖືກນໍາໃຊ້ຢ່າງກວ້າງຂວາງໃນປະຕິກິລິຍາ PCR ເຊັ່ນ Taq enzyme, ແຕ່ມັນມີຄວາມຕ້ານທານຄວາມຮ້ອນສູງກວ່າ enzyme Taq, ດັ່ງນັ້ນມັນຍັງມີຜົນກະທົບທີ່ດີກວ່າ PCR ກັບແມ່ແບບເນື້ອຫາ GC ສູງ.
· enzyme ນີ້ໂດຍພື້ນຖານແລ້ວບໍ່ມີກິດຈະກໍາ 3′→5′ exonuclease ແລະ 5′→3′ ກິດຈະກໍາ exonuclease, ສະນັ້ນມັນຍັງສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ສໍາລັບການ sequencing Dideoxy.
· enzyme ນີ້ມີກິດຈະກໍາ RTase.ໃນທີ່ປະທັບຂອງ Mn2+, ກິດຈະກໍາ RTase ຈະຖືກປັບປຸງ.ການນໍາໃຊ້ຄຸນສົມບັດນີ້, ມັນສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອປະຕິບັດປະຕິກິລິຍາ transcription ແລະປະຕິກິລິຍາ PCR ໃນທໍ່ດຽວກັນ, ນັ້ນແມ່ນ, RT-PCR ຂັ້ນຕອນດຽວ.ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ໃນທີ່ປະທັບຂອງ Mn2+, ຄວາມຖືກຕ້ອງຂອງ RT-PCR ແມ່ນບໍ່ສູງ.ກິດຈະກໍາ RT ບໍ່ມີຫຍັງກ່ຽວຂ້ອງກັບກິດຈະກໍາ rnaase H.
· ກິດຈະກໍາທີ່ເພີ່ມຂຶ້ນຂອງ Tth-DNA polymerase (pH9, optimum +55℃~+70℃, ສູງສຸດ +95℃) ເອົາຊະນະບັນຫາທີ່ເກີດຈາກໂຄງສ້າງຮອງ RNA.ຜົນໄດ້ຮັບ cDNA ສາມາດຂະຫຍາຍໄດ້ໂດຍ PCR ທີ່ມີ enzyme ດຽວກັນໃນທີ່ປະທັບຂອງ Mg2+ ions.
· ຄວາມສາມາດຂອງ Tth-DNA polymerase ເພື່ອປະຕິບັດການຖອດຂໍ້ຄວາມແບບປີ້ນກັບກັນແລະການຂະຫຍາຍ DNA ຢູ່ໃນອຸນຫະພູມສູງເຮັດໃຫ້ enzyme ນີ້ເປັນປະໂຫຍດສໍາລັບການວິເຄາະປະລິມານ RT-PCR, cloning, ແລະ gene expression ຂອງ cellular ແລະ viral RNA.
· Tth-DNA polymerase ແມ່ນໃຊ້ສໍາລັບ RT-PCR ເພື່ອຂະຫຍາຍ RNA ເຖິງ 1kb.
ຄຸນນະສົມບັດແລະຂໍ້ໄດ້ປຽບ
Tth DNA polymerase:
• ຮັບປະກັນຂະໜາດຜະລິດຕະພັນຂອງຕິກິຣິຍາຕ່ອງໂສ້ໂພລີເມີເຣເຣສ (PCR), ຢ່າງໜ້ອຍ 1000 bp ໃນປະຕິກິລິຍາ RT-PCR.
•ຍອມຮັບ deoxyribonucleoside triphosphate ທີ່ຖືກດັດແປງເປັນ substrate
•ບໍ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບກິດຈະກໍາ RNase H
•ມີຄວາມຫມັ້ນຄົງຄວາມຮ້ອນສູງເພື່ອເອົາຊະນະບັນຫາ, ປົກກະຕິແລ້ວກ່ຽວຂ້ອງກັບໂຄງສ້າງມັດທະຍົມສູງທີ່ມີຢູ່ໃນ RNA
RevTaq RT-PCR DNA polymerase
DNA polymerase ທົນທານຕໍ່ຄວາມຮ້ອນທີ່ມີກິດຈະກໍາ transcriptase ປີ້ນກັບກັນ
RevTaq-RT-PCR-DNA polymerase ແມ່ນວິສະວະກໍາ, ທົນທານຕໍ່ຄວາມຮ້ອນສູງ, ເຮັດວຽກສອງຢ່າງທີ່ມີ enzyme transcriptase ແລະ DNA polymerase ທີ່ໄດ້ຮັບໂດຍຜ່ານການວິວັດທະນາການຊີ້ນໍາແລະປອມ.
· ເຄິ່ງຊີວິດຂອງ RevTaq RT-PCR DNA polymerase ຢູ່ທີ່ 95°C ແມ່ນຫຼາຍກວ່າ 40 ນາທີ.
· RevTaq RT-PCR DNA polymerase ອະນຸຍາດໃຫ້ການຖອດຂໍ້ຄວາມແບບປີ້ນກັບອຸນຫະພູມສູງໂດຍກົງຈາກແມ່ແບບ RNA, ແລະຂັ້ນຕອນການຖອດຂໍ້ຄວາມແບບປີ້ນຄືນສາມາດເຮັດຊ້ໍາໄດ້ຫຼາຍຄັ້ງເພື່ອສ້າງແມ່ແບບ cDNA ຫຼາຍຂຶ້ນ.
· RevTaq RT-PCR DNA polymerase ອະນຸຍາດໃຫ້ "ຂັ້ນຕອນສູນ" RT-PCR (ບໍ່ມີຂັ້ນຕອນການຖອດຂໍ້ຄວາມແບບປີ້ນກັບຄວາມຮ້ອນ isothermal), ເພາະວ່າໃນຂັ້ນຕອນການຂະຫຍາຍ PCR cyclic, reverse transcription ແລະ DNA amplification ເກີດຂຶ້ນພ້ອມໆກັນ.ນີ້ຍັງສົ່ງເສີມປະຕິກິລິຍາການຖອດຂໍ້ຄວາມແບບປີ້ນກັບກັນຢູ່ໃນອຸນຫະພູມສູງ, ດັ່ງນັ້ນການຫຼຸດຜ່ອນບັນຫາທີ່ພົບໃນການລະລາຍໂຄງສ້າງຮອງທີ່ເຂັ້ມແຂງໃນ RNA ໃນອຸນຫະພູມສູງ.
·ເນື່ອງຈາກສູດການເລີ່ມຕົ້ນຮ້ອນທີ່ອີງໃສ່ aptamer, RevTaq RT-PCR DNA polymerase ຈະໃຫ້ຜົນໄດ້ຮັບທີ່ດີກວ່າເມື່ອອຸນຫະພູມການຫມູນວຽນແລະການຂະຫຍາຍສູງກວ່າ 57 ° C.
· ເນື່ອງຈາກ enzyme ແມ່ນທົນທານຕໍ່ຄວາມຮ້ອນ, ແນະນໍາໃຫ້ອອກແບບ primers ແລະ probes ທີ່ມີຈຸດ melting ສູງຫຼາຍ (> 60 ° C).
· ມັນແມ່ນແນະນໍາໃຫ້ປັບປຸງອຸນຫະພູມຂອງຂັ້ນຕອນການ annealing / ການຂະຫຍາຍໂດຍຜ່ານການ gradient ອຸນຫະພູມໃນລະຫວ່າງຂະບວນການຕັ້ງຕິກິຣິຍາ.
·ອຸນຫະພູມສູງຂຶ້ນ, ຄວາມສະເພາະຂອງ PCR ສູງຂຶ້ນ.ປົກກະຕິວົງຈອນການຖອດຂໍ້ຄວາມແບບປີ້ນກັບແມ່ນປະຕິບັດໃນອຸນຫະພູມທີ່ສູງກວ່າວົງຈອນ PCR, ເພາະວ່າການປະສົມ DNA Primer:RNA Template ປົກກະຕິແລ້ວມີຈຸດລະລາຍສູງກວ່າ DNA Primer:cDNA Template duplex.
· RevTaq RT-PCR DNA polymerase ແມ່ນວິສະວະກໍາພັນທຸກໍາແລະການເພີ່ມປະສິດທິພາບ, ແລະຂະຫນາດ amplicon ແມ່ນຢູ່ລະຫວ່າງ 60-300 bp.
ຂີດຈຳກັດການກວດຫາ RevTaq RT-PCR DNA polymerase ຮອດ 4 ສຳເນົາ/
ລະບົບປະຕິກິລິຢາທີ່ດີທີ່ສຸດ (ການສ້າງຕັ້ງຂອງ primers ຈຸດ melting ສູງ) ແມ່ນສະແດງຢູ່ໃນຮູບ.RevTaq RT-PCR DNA polymerase-driven RT-PCR ສະແດງໃຫ້ເຫັນຄວາມອ່ອນໄຫວດີກວ່າ TaqPath 1-step RT-qPCR master mix, ແລະການຊອກຄົ້ນຫາຕ່ໍາ gradient ການເຈືອຈາງຕົວຢ່າງ.
ຂໍ້ດີເພີ່ມເຕີມ:
ຟັງຊັນການເລີ່ມຕົ້ນໄວ → ຂັ້ນຕອນການແຍກຄວາມຮ້ອນເບື້ອງຕົ້ນສາມາດຂ້າມໄດ້.
Hot-start aptamer formula → ໃຫ້ການເຄື່ອນໄຫວຂອງເອນໄຊ 100% ທັນທີ ແລະປ້ອງກັນການຂະຫຍາຍທີ່ບໍ່ສະເພາະໃນອຸນຫະພູມຕໍ່າ (<57°C).
ຟັງຊັນ Cleavage → ຂັ້ນຕອນການສະກັດເອົາ RNA ແມ່ນຖືກລະເວັ້ນ, ເພາະວ່າ RevTaq RT-PCR DNA polymerase ຍັງສາມາດປະມວນຜົນຕົວຢ່າງປະຕິກິລິຢາດິບໄດ້.ມັນສາມາດທໍາລາຍເຍື່ອຫຸ້ມເຊນຂອງ eukaryotes, ເຊື້ອແບັກທີເຣັຍແລະໄວຣັສທັນທີໃນວົງຈອນ RT-PCR ຮ້ອນ.
ລະດັບວັດຖຸດິບ IVD →ມາດຕະຖານທີ່ມີຄຸນນະພາບສູງແລະລາຄາທີ່ແຂ່ງຂັນທີ່ສຸດ
ເວລາປະກາດ: ສິງຫາ-12-2021