ຄໍາແນະນໍາສໍາລັບການປັບປຸງການຟື້ນຕົວຂອງກາວ

1. ເພີ່ມການໂຫຼດຕົວຢ່າງໃນລະຫວ່າງການ electrophoresis.

2. ໃຊ້ buffer electrophoresis ທີ່ກຽມໄວ້ສົດໆ.

3. ເມື່ອຕັດກາວ, ພະຍາຍາມຕັດພຽງແຕ່ກາວທີ່ມີເສັ້ນດ່າງເພື່ອຫຼຸດຜ່ອນປະລິມານຂອງການຕັດກາວ: ບໍ່ຕ້ອງການກາວທີ່ມີຊິ້ນສ່ວນຈຸດປະສົງຈໍານວນຫນ້ອຍ, ຖ້າບໍ່ດັ່ງນັ້ນມັນຈະສົ່ງຜົນກະທົບຕໍ່ອັດຕາການຟື້ນຕົວ.

4. ຫຼັງຈາກການລະລາຍຂອງກາວສອງຫຼືຫຼາຍກວ່ານັ້ນ, ໃຫ້ໃຊ້ທໍ່ບໍ່ວ່າປະລິມານຂະຫນາດໃຫຍ່ເທົ່າໃດແລະໂອນມັນໄປຫາຖັນດຽວກັນ.

5. ການແກ້ໄຂທີ່ເພີ່ມໃນ sol ສາມາດມີພຽງເລັກນ້ອຍຫຼາຍ, ເຊິ່ງເຮັດໃຫ້ການຜູກມັດຂອງ DNA ກັບເຍື່ອ, ແຕ່ໂດຍທົ່ວໄປແລ້ວບໍ່ເກີນ 750ul.

6. ກຸນແຈສໍາລັບການຟື້ນຟູ gel ແມ່ນການຜູກມັດ DNA ກັບຖັນໂດຍຜ່ານຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງເກືອ, ຄວາມເປັນກົດ (ຄ່າ) ແລະ hydrophobicity ຂອງການແກ້ໄຂໃນຖັນ.ດັ່ງນັ້ນ, ຖ້າ pH ຂອງ buffer electrophoresis ສູງເກີນໄປ, 10ul (pH 5.0, 3mol / L NaAC) ສາມາດຖືກເພີ່ມໃສ່ sol;ເພື່ອສະກັດໂມເລກຸນ DNA ໃນເຍື່ອໄດ້ດີຂຶ້ນ, isopropanol 30% ສາມາດຖືກເພີ່ມໃສ່ຄວາມຮ້ອນເຂົ້າໄປໃນຂອງແຫຼວຫຼັງຈາກລະລາຍກາວ.

7. ກ່ອນທີ່ຈະເພີ່ມ eluent, ອອກຈາກຖັນຢູ່ໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງສໍາລັບສອງສາມນາທີ (ປະມານ 10 ນາທີ) ເພື່ອໃຫ້ເອທານອນ evaporate ຢ່າງເຕັມສ່ວນ.

8. ສຸດທ້າຍ, ເພີ່ມ eluent ຫນ້ອຍລົງເພື່ອຫຼຸດຜ່ອນປະລິມານການຟື້ນຕົວ.ໂດຍທົ່ວໄປ, 30-50μl eluent ຖືກນໍາໃຊ້ສໍາລັບການ elution (ບໍ່ຫນ້ອຍເກີນໄປ, ຖ້າບໍ່ດັ່ງນັ້ນມັນຈະບໍ່ສາມາດປຽກເຍື່ອ, ທີ່ບໍ່ເອື້ອອໍານວຍໃຫ້ແກ່ elution);ຢອດ elution ແມ່ນຢູ່ໃນໃຈກາງຂອງເຍື່ອ, ເພື່ອ elute DNA ຜູກມັດກັບເຍື່ອຢ່າງເຕັມສ່ວນ.

9. ຫລັງຈາກທີ່ຕື່ມ eluent, ມັນສາມາດ eluted ໃນອາບນ້ໍາຂອງ 55 ອົງສາເປັນເວລາ 5 ນາທີຫຼືວາງໃນອາບນ້ໍາຂອງ 50 ອົງສາຫຼາຍກ່ວາ 10 ນາທີ, ຫຼືປະທັບຕາດ້ວຍ parafilm ທີ່ 4 ອົງສາຄ້າງຄືນ, ແລ້ວ centrifuged ສໍາລັບການຟື້ນຟູໃນມື້ຕໍ່ມາ, ຜົນກະທົບແມ່ນດີ.

10. ຕື່ມການ centrifuged eluate ກັບຄືນໄປບ່ອນຖັນ adsorption ແລະ centrifuge ອີກເທື່ອຫນຶ່ງ.

ວິທີການແລະຂັ້ນຕອນລະອຽດສໍາລັບການຟື້ນຕົວຜະລິດຕະພັນ PCR

1. ການລີໄຊເຄີນຢາງທຳມະດາ

ຖ້າທ່ານຕ້ອງການທີ່ຈະຟື້ນຕົວກາວ, ມັນດີທີ່ສຸດທີ່ຈະໃຊ້ຊຸດ, ເຊິ່ງສະດວກແລະມີອັດຕາການຟື້ນຕົວສູງກວ່າເລັກນ້ອຍ.ຖ້າທ່ານຕ້ອງການກູ້ມັນດ້ວຍຕົນເອງແທ້ໆ, ທ່ານສາມາດເພີ່ມປະລິມານ TE 3 ເທົ່າຫຼັງຈາກຕັດກາວ.ຫຼັງຈາກການລະລາຍໃນອາບນ້ໍາ, phenol, phenol / chloroform ຖືກສະກັດອອກຢ່າງສະອາດ, ແລະເອທານອນແມ່ນ precipitated.ນັ້ນຄືມັນ.

2. ການຟື້ນຕົວ DNA ຈາກ gels ຈຸດ melting ຕ່ໍາ

ການຊໍາລະລ້າງຊິ້ນ DNA ຕື່ມ TE (10 mmol/l Tris-HCl pH8.0, 0.1 mmol/l EDTA) ເທົ່າກັບປະລິມານຂອງເຈນ, ແລະວາງໃນອາບນ້ໍາ 65 ອົງສາ C ເປັນເວລາ 5 ນາທີເພື່ອໃຫ້ເຈນລະລາຍຫມົດ.

ຫຼັງຈາກທີ່ມັນຖືກນໍາມາສູ່ອຸນຫະພູມຫ້ອງ, ປະລິມານທີ່ເທົ່າທຽມກັນຂອງ phenol (ອີ່ມຕົວດ້ວຍ TE, TE ໄດ້ຖືກຜະນຶກເຂົ້າກັນໃນຊັ້ນເທິງ, ແລະຊັ້ນຕ່ໍາຂອງ phenol ຖືກໂຍກຍ້າຍອອກ), ແລະປະສົມໄດ້ຖືກປະສົມຄ່ອຍໆ (ບໍ່ຈໍາເປັນຕ້ອງປະສົມ), ແລະ centrifuged ຢູ່ທີ່ 12,000 rpm ສໍາລັບ 3 ນາທີ.ເຮັດຊ້ໍາອີກ 1-2 ເທື່ອ.

ເອົາ supernatant, ເພີ່ມ 0.1 ປະລິມານຂອງ 3mol / L sodium acetate (pH 5.2) ແລະ 2.5 ເທົ່າປະລິມານຂອງເອທານອນຢ່າງແທ້ຈິງເພື່ອປະຕິບັດການ precipitation ເອທານອນ.ການລະລາຍ DNA ທີ່ບໍລິສຸດດ້ວຍປະລິມານທີ່ເຫມາະສົມຂອງ TE, ການວັດແທກເນື້ອໃນແລະການກະກຽມສໍາລັບການນໍາໃຊ້ (ມັນສາມາດນໍາໃຊ້ສໍາລັບການວິເຄາະໂຄງສ້າງຂອງເຊື້ອສາຍເປົ້າຫມາຍ, ການກະກຽມ probe, ແລະອື່ນໆ).

3. ການຟື້ນຟູ PCR ທີ່ມີຄວາມສະເພາະການຂະຫຍາຍທີ່ດີ

ຖ້າຄວາມສະເພາະຂອງການຂະຫຍາຍ PCR ແມ່ນດີ, ມັນເປັນພຽງແຕ່ການເຮັດຄວາມສະອາດແລະການຟື້ນຕົວຂອງຜະລິດຕະພັນ PCR ງ່າຍດາຍ.ທ່ານສາມາດເພີ່ມ 50ug/ml proteinase K ກັບຜະລິດຕະພັນ PCR, 37 ອົງສາສໍາລັບ 1h, ສະກັດຫນຶ່ງຄັ້ງດ້ວຍ phenol / chloroform, ສະກັດຫນຶ່ງຄັ້ງດ້ວຍ chloroform, ແລະເພີ່ມປະລິມານ supernatant 0.1.sodium acetate ໄດ້ຖືກຟື້ນຕົວໂດຍການຝົນທີ່ມີ 2.5 ປະລິມານຂອງເອທານອນຢ່າງແທ້ຈິງ.

ຜະ​ລິດ​ຕະ​ພັນ​ທີ່​ກ່ຽວ​ຂ້ອງ:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/