• ເຟສບຸກ
  • ລິ້ງຄ໌
  • youtube

ເຄື່ອງ PCR|ເຈົ້າເຂົ້າໃຈແທ້ໆບໍ?

ເຕັກໂນໂລຊີ PCR ທີ່ໄດ້ຮັບລາງວັນໂນແບລ

ໃນປີ 1993, ນັກວິທະຍາສາດອາເມລິກາ Mulis ໄດ້ຮັບລາງວັນໂນແບລດ້ານເຄມີ, ແລະຜົນສໍາເລັດຂອງລາວແມ່ນການປະດິດສ້າງເຕັກໂນໂລຢີ PCR.ຄວາມມະຫັດສະຈັນຂອງເທກໂນໂລຍີ PCR ແມ່ນຢູ່ໃນລັກສະນະດັ່ງຕໍ່ໄປນີ້: ທໍາອິດ, ຈໍານວນ DNA ທີ່ຈະຂະຫຍາຍໃຫຍ່ຂື້ນແມ່ນຫນ້ອຍທີ່ສຸດ, ແລະທາງທິດສະດີຫນຶ່ງໂມເລກຸນສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອຂະຫຍາຍ;ອັນທີສອງ, ປະສິດທິພາບການຂະຫຍາຍແມ່ນສູງ, ແລະຈໍານວນຂອງ gene ເປົ້າຫມາຍແມ່ນ exponential.ການຂະຫຍາຍ, ຫຼາຍກວ່າ 10 ລ້ານເທື່ອໃນສອງສາມຊົ່ວໂມງ.ໃນປັດຈຸບັນເຄື່ອງມື PCR ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ຢ່າງກວ້າງຂວາງໃນການຄົ້ນຄວ້າວິທະຍາສາດຊີວິດແລະຫຼາຍດ້ານ.

ແບບຈໍາລອງທີ່ແຕກຕ່າງກັນ ແລະຜູ້ຜະລິດເຄື່ອງສູບຄວາມຮ້ອນສາມາດສະແດງປະສິດທິພາບ ແລະຄວາມສາມາດເຮັດຊ້ຳໄດ້ແຕກຕ່າງກັນ.ຄວາມແຕກຕ່າງເຫຼົ່ານີ້ມີຜົນກະທົບບໍ່ພຽງແຕ່ປະສິດທິພາບ PCR ແຕ່ຍັງຄວາມຖືກຕ້ອງແລະຄວາມສອດຄ່ອງຂອງຂໍ້ມູນທີ່ໄດ້ຮັບ.ຄວາມເຂົ້າໃຈລັກສະນະເຄື່ອງ PCR ສາມາດຊ່ວຍພວກເຮົາເພີ່ມຄວາມສໍາເລັດຂອງການທົດລອງຂອງພວກເຮົາໄດ້ສູງສຸດ.

ໂມດູນຄວາມຮ້ອນ

ຄວາມຖືກຕ້ອງຂອງອຸນຫະພູມຂອງວົງຈອນຄວາມຮ້ອນສາມາດເປັນການຕັດສິນໃຈສໍາລັບຄວາມສໍາເລັດຫຼືຄວາມລົ້ມເຫຼວຂອງ PCR.ຄວາມສອດຄ່ອງຂອງອຸນຫະພູມທີ່ດີຕໍ່ກັນຢູ່ໃນທ່ອນຄວາມຮ້ອນແມ່ນສໍາຄັນຕໍ່ກັບຜົນໄດ້ຮັບ PCR ທີ່ເຊື່ອຖືໄດ້ແລະສາມາດແຜ່ພັນໄດ້.

ວິທີຫນຶ່ງເພື່ອຮັບປະກັນຄວາມຖືກຕ້ອງຂອງຄວາມຮ້ອນແມ່ນການທົດສອບເລື້ອຍໆໂດຍໃຊ້ຊຸດກວດສອບອຸນຫະພູມແລະ recalibrate ຕາມຄວາມຕ້ອງການໂດຍຜູ້ຊ່ຽວຊານທີ່ໄດ້ຮັບການຝຶກອົບຮົມ.ການ​ທົດ​ສອບ​ການ​ກວດ​ສອບ​ອຸນ​ຫະ​ພູມ​ໂດຍ​ປົກ​ກະ​ຕິ​ໄດ້​ຖືກ​ນໍາ​ໃຊ້​ເພື່ອ​:

ຄວາມ​ຖືກ​ຕ້ອງ​ທີ່​ດີ​ຕໍ່​ກັນ​ກັບ​ການ​ຕັ້ງ​ຄ່າ​ອຸນ​ຫະ​ພູມ​ໃນ​ຮູບ​ແບບ isothermal​

ຄວາມ​ຖືກ​ຕ້ອງ​ທີ່​ດີ​ຕໍ່​ກັບ​ການ​ຕັ້ງ​ຄ່າ​ອຸນ​ຫະ​ພູມ​ຫຼັງ​ຈາກ​ການ​ປ່ຽນ​ແປງ​ອຸນ​ຫະ​ພູມ​

ຄວາມຖືກຕ້ອງຂອງອຸນຫະພູມຝາປິດ

ເຂົ້າ​ໃຈ1

Primer Annealing ການຄວບຄຸມອຸນຫະພູມ

ການຄວບຄຸມອຸນຫະພູມແບບ Gradient ແມ່ນຫນ້າທີ່ຂອງເຄື່ອງມື PCR ທີ່ອໍານວຍຄວາມສະດວກໃນການເພີ່ມປະສິດທິພາບຂອງ primer annealing ໃນ PCR.ຈຸດ​ປະ​ສົງ​ຂອງ​ການ​ຕັ້ງ​ຄ່າ gradient ແມ່ນ​ເພື່ອ​ບັນ​ລຸ​ອຸນ​ຫະ​ພູມ​ທີ່​ແຕກ​ຕ່າງ​ກັນ​ລະ​ຫວ່າງ​ໂມ​ດູນ​, ແລະ​ໂດຍ ≥2 ° C ອຸນ​ຫະ​ພູມ​ເພີ່ມ​ຂຶ້ນ​ແລະ​ຫຼຸດ​ລົງ​ລະ​ຫວ່າງ​ແຕ່​ລະ​ຖັນ​, ອຸນ​ຫະ​ພູມ​ທີ່​ແຕກ​ຕ່າງ​ກັນ​ສາ​ມາດ​ທົດ​ສອບ​ພ້ອມ​ກັນ​ເພື່ອ​ໃຫ້​ໄດ້​ຮັບ​ອຸນ​ຫະ​ພູມ primer annealing ທີ່​ດີ​ທີ່​ສຸດ​.ໃນທາງທິດສະດີ, gradient ທີ່ແທ້ຈິງບັນລຸອຸນຫະພູມເສັ້ນຊື່ລະຫວ່າງໂມດູນ.

ແນວໃດກໍ່ຕາມ, ເຄື່ອງປັ່ນຄວາມຮ້ອນແບບ gradient ທຳມະດາໂດຍທົ່ວໄປແລ້ວຈະນຳໃຊ້ທໍ່ລະບາຍຄວາມຮ້ອນອັນດຽວ ແລະ ຄວບຄຸມອຸນຫະພູມຜ່ານສອງອົງປະກອບຄວາມຮ້ອນ ແລະ ຄວາມເຢັນທີ່ຕັ້ງຢູ່ທັງສອງສົ້ນ, ມັກຈະເຮັດໃຫ້ເກີດຂໍ້ຈຳກັດຕໍ່ໄປນີ້:

ສາມາດຕັ້ງຄ່າໄດ້ພຽງແຕ່ສອງອຸນຫະພູມ: ອຸນຫະພູມສູງແລະຕ່ໍາສໍາລັບການ annealing primer ໄດ້ຖືກຕັ້ງຢູ່ໃນທັງສອງສົ້ນຂອງໂມດູນຄວາມຮ້ອນ, ແລະການຕັ້ງຄ່າທີ່ຊັດເຈນຂອງອຸນຫະພູມອື່ນໆບໍ່ສາມາດບັນລຸໄດ້ລະຫວ່າງໂມດູນ.

ເນື່ອງຈາກການແລກປ່ຽນຄວາມຮ້ອນລະຫວ່າງຖັນທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ອຸນຫະພູມລະຫວ່າງພາກພື້ນທີ່ແຕກຕ່າງກັນຢູ່ໃນໂມດູນມີແນວໂນ້ມທີ່ຈະປະຕິບັດຕາມເສັ້ນໂຄ້ງ sigmoidal ແທນທີ່ຈະເປັນ gradient linear ທີ່ແທ້ຈິງ.

ເຂົ້າ​ໃຈ2

ອຸນຫະພູມຕົວຢ່າງ

ຄວາມສາມາດຂອງເຄື່ອງສູບຄວາມຮ້ອນໃນການຄວບຄຸມອຸນຫະພູມຕົວຢ່າງແມ່ນມີຄວາມສໍາຄັນຫຼາຍສໍາລັບຄວາມຖືກຕ້ອງຂອງຜົນໄດ້ຮັບ PCR.ຕົວກໍານົດການສະເພາະຂອງເຄື່ອງມືເຊັ່ນ: ອັດຕາການລ້າ, ເວລາຖື, ແລະສູດການຄິດໄລ່ແມ່ນສໍາຄັນສໍາລັບການຄາດເດົາອຸນຫະພູມຕົວຢ່າງ.

ອັດຕາການໃຫ້ຄວາມຮ້ອນແລະຄວາມເຢັນຂອງເຄື່ອງ PCR ຫມາຍຄວາມວ່າອຸນຫະພູມມີການປ່ຽນແປງລະຫວ່າງຂັ້ນຕອນ PCR ທີ່ເກີດຂື້ນໃນໄລຍະເວລາທີ່ແນ່ນອນ.ເນື່ອງຈາກມັນໃຊ້ເວລາຈໍານວນທີ່ແນ່ນອນສໍາລັບຄວາມຮ້ອນທີ່ຈະໂອນຈາກໂມດູນໄປຫາຕົວຢ່າງ, ອັດຕາການໃຫ້ຄວາມຮ້ອນແລະຄວາມເຢັນຕົວຈິງຂອງຕົວຢ່າງຈະຊ້າລົງ.ດັ່ງນັ້ນ, ຄໍານິຍາມຂອງຄວາມໄວການປ່ຽນແປງອຸນຫະພູມຕ້ອງໄດ້ຮັບການຈໍາແນກແລະເຂົ້າໃຈ.

ອັດຕາຄ່າທາງລາດຂອງໂມດູນສູງສຸດ ຫຼືສູງສຸດສະແດງເຖິງການປ່ຽນແປງອຸນຫະພູມທີ່ໄວທີ່ສຸດທີ່ໂມດູນສາມາດບັນລຸໄດ້ໃນໄລຍະເວລານ້ອຍຫຼາຍໃນລະຫວ່າງທາງລາດ.

ອັດຕາຕັນທາງຍ່າງສະເລ່ຍສະແດງເຖິງອັດຕາການປ່ຽນແປງຂອງອຸນຫະພູມໃນໄລຍະເວລາທີ່ຍາວກວ່າແລະຈະສະຫນອງມາດຕະການທີ່ເປັນຕົວແທນຂອງຄວາມໄວເຄື່ອງ PCR ຫຼາຍຂຶ້ນ.

ອັດຕາການໃຫ້ຄວາມຮ້ອນແລະຄວາມເຢັນຂອງຕົວຢ່າງສູງສຸດແລະອັດຕາການໃຫ້ຄວາມຮ້ອນຂອງຕົວຢ່າງສະເລ່ຍແລະຄວາມເຢັນສະທ້ອນໃຫ້ເຫັນເຖິງອຸນຫະພູມຕົວຈິງທີ່ໄດ້ຮັບໂດຍຕົວຢ່າງ.ອັດຕາການໃຫ້ຄວາມຮ້ອນຂອງຕົວຢ່າງແລະຄວາມເຢັນຈະສະຫນອງການປຽບທຽບທີ່ຖືກຕ້ອງກວ່າຂອງການປະຕິບັດຂອງເຄື່ອງ PCR ແລະຜົນກະທົບທີ່ອາດມີຕໍ່ຜົນໄດ້ຮັບ PCR.

ເມື່ອປະຕິບັດການທົດແທນ cycler, ມັນແນະນໍາໃຫ້ໃຊ້ເຄື່ອງມືທີ່ມີໂຄງການອັດຕາການລ້າທີ່ຈໍາລອງຮູບແບບທີ່ຜ່ານມາສໍາລັບການທົດແທນທີ່ງ່າຍກວ່າແລະມີຜົນກະທົບຫນ້ອຍທີ່ສຸດຕໍ່ PCR repeatability.

ເຂົ້າ​ໃຈ3

ເຄື່ອງສູບຄວາມຮ້ອນຄວນຖືກອອກແບບຕາມຂັ້ນຕອນພຽງແຕ່ຫຼັງຈາກຕົວຢ່າງຮອດອຸນຫະພູມທີ່ກໍານົດໄວ້.ດ້ວຍວິທີນີ້, ເວລາທີ່ຕົວຢ່າງຖືກຮັກສາໄວ້ໃນອຸນຫະພູມທີ່ກໍານົດໄວ້ຈະຖືກຮັກສາໄວ້ຢ່າງຖືກຕ້ອງກັບເງື່ອນໄຂວົງຈອນທີ່ສອດຄ້ອງກັນທີ່ຕ້ອງການໃນຂະບວນການປະຕິບັດງານ.

ເຄື່ອງຈັກລະບາຍຄວາມຮ້ອນມັກຈະໃຊ້ສູດການຄິດໄລ່ທາງຄະນິດສາດທີ່ຊັບຊ້ອນເພື່ອຮັບປະກັນວ່າຕົວຢ່າງສາມາດເຂົ້າຫາອຸນຫະພູມທີ່ຕັ້ງໄວ້ໄດ້ໄວຕາມໂຄງການທີ່ຕັ້ງໄວ້ລ່ວງໜ້າ.ອີງຕາມປະລິມານຂອງລະບົບຕິກິຣິຍາແລະຄວາມຫນາຂອງພາດສະຕິກ PCR ທີ່ໃຊ້, ສູດການຄິດໄລ່ສາມາດຄາດຄະເນອຸນຫະພູມຂອງຕົວຢ່າງແລະເວລາທີ່ຈະບັນລຸອຸນຫະພູມທີ່ກໍານົດໄວ້.ອີງໃສ່ສູດການຄິດໄລ່ເຫຼົ່ານີ້, ໃນລະຫວ່າງຂະບວນການເຮັດຄວາມຮ້ອນຫຼືຄວາມເຢັນຂອງວົງຈອນຄວາມຮ້ອນ, ອຸນຫະພູມຕັນມັກຈະເກີນຄ່າທີ່ກໍານົດໄວ້ໂດຍຜ່ານຂະບວນການທີ່ເອີ້ນວ່າການ overshoot ຕັນຄວາມຮ້ອນຫຼື undershoot.ການຕິດຕັ້ງດັ່ງກ່າວຮັບປະກັນວ່າຕົວຢ່າງເຖິງອຸນຫະພູມທີ່ກໍານົດໄວ້ໄວເທົ່າທີ່ຈະໄວໄດ້ໂດຍບໍ່ມີການ overshooting ຫຼື undershooting ຕົວຂອງມັນເອງ.

ຜ່ານການທົດລອງ

ປັດໃຈທີ່ສາມາດເພີ່ມການສົ່ງກະແສໄຟຟ້າຂອງເຄື່ອງຈັກລະບາຍຄວາມຮ້ອນລວມມີອັດຕາທາງລາດ, ການຕັ້ງຄ່າບລັອກຄວາມຮ້ອນ, ແລະການລວມຕົວຂອງລະບົບອັດຕະໂນມັດ.

ອັດຕາການໃຫ້ຄວາມຮ້ອນແລະຄວາມເຢັນຂອງວົງຈອນຄວາມຮ້ອນສະແດງເຖິງຄວາມໄວທີ່ມັນໄປຮອດອຸນຫະພູມທີ່ກໍານົດໄວ້.ອຸນຫະພູມເພີ່ມຂຶ້ນແລະຫຼຸດລົງໄວ, PCR ຈະແລ່ນໄວຂຶ້ນ, ຊຶ່ງຫມາຍຄວາມວ່າການທົດລອງສາມາດສໍາເລັດໄດ້ໃນໄລຍະເວລາທີ່ກໍານົດໄວ້.ນອກຈາກນັ້ນ, ການທົດລອງສາມາດເລັ່ງໄດ້ໂດຍໃຊ້ DNA polymerases ທີ່ໄວຂຶ້ນ.

ເຂົ້າ​ໃຈ4

ການອອກແບບຂອງໂມດູນ cycler ຄວາມຮ້ອນແມ່ນຍັງສໍາຄັນສໍາລັບການທົດລອງ PCR.ຕົວຢ່າງ, ໂມດູນທີ່ສາມາດທົດແທນໄດ້ອະນຸຍາດໃຫ້ມີຄວາມຍືດຫຍຸ່ນໃນຈໍານວນຕົວຢ່າງຕໍ່ແລ່ນ.ນອກຈາກນັ້ນ, ໂມດູນການໃຫ້ຄວາມຮ້ອນທີ່ມີໂມດູນທີ່ສາມາດຄວບຄຸມໄດ້ສ່ວນບຸກຄົນແມ່ນເຫມາະສົມສໍາລັບການດໍາເນີນໂຄງການ PCR ທີ່ແຕກຕ່າງກັນພ້ອມກັນໃນຫນຶ່ງ cycler ຄວາມຮ້ອນ.

ເຂົ້າ​ໃຈ5

ສໍາລັບ PCR ທີ່ມີຄວາມໄວສູງອັດຕະໂນມັດ, ຊອບແວທີ່ຄວບຄຸມລະບົບການຈັດການທໍ່ຄວນຈະເປັນໂຄງການແລະເຂົ້າກັນໄດ້.ລະບົບອັດຕະໂນມັດແມ່ນເຫມາະສົມສໍາລັບການປະຕິບັດປະຕິກິລິຍາ PCR ທີ່ມີຄວາມໄວສູງເພາະວ່າພວກເຂົາສາມາດດໍາເນີນການຢ່າງຕໍ່ເນື່ອງດ້ວຍການແຊກແຊງຂອງມະນຸດພຽງເລັກນ້ອຍ, ດັ່ງນັ້ນການຫຼຸດຜ່ອນເວລາທີ່ຕ້ອງການສໍາລັບການຕິດຕັ້ງແບບທົດລອງຄູ່ມືແລະການເພີ່ມຈໍານວນຂອງຕິກິຣິຍາໃນໄລຍະເວລາໃດຫນຶ່ງ.

ຄວາມຫນ້າເຊື່ອຖື, ຄວາມທົນທານແລະການຮັບປະກັນຄຸນນະພາບຂອງເຄື່ອງສູບຄວາມຮ້ອນ

ນອກ ເໜືອ ໄປຈາກປະສິດທິພາບແລະຄວາມສາມາດໃນການສົ່ງຜ່ານ, ເຄື່ອງ PCR ຍັງສາມາດທົນກັບການນໍາໃຊ້ຊ້ໍາຊ້ອນບາງຢ່າງ, ຄວາມກົດດັນດ້ານສິ່ງແວດລ້ອມ, ແລະເງື່ອນໄຂການຂົນສົ່ງ.ຜູ້ຜະລິດບາງຄົນອາດຈະລາຍງານກ່ຽວກັບວິທີການປະຕິບັດການທົດສອບຄວາມຫນ້າເຊື່ອຖືແລະຄວາມທົນທານ.ການກວດຫາເຄື່ອງມື PCR ທີ່ສອດຄ້ອງກັນປະກອບມີ:

ຄວາມຫນ້າເຊື່ອຖື: ເຄື່ອງເຈາະກົນຈັກຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອເຮັດການທົດສອບຊ້ໍາຊ້ອນກ່ຽວກັບອົງປະກອບຂອງເຄື່ອງມືທີ່ໃຊ້ເລື້ອຍໆເຊັ່ນຝາປິດຄວາມຮ້ອນ, ແຜງຄວບຄຸມ / ຫນ້າຈໍສໍາຜັດ, ແລະໂມດູນການຮອບວຽນອຸນຫະພູມ.

ຄວາມກົດດັນອາກາດລ້ອມຮອບ: ຫ້ອງສະພາບແວດລ້ອມສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອຈໍາລອງສະພາບທີ່ແຕກຕ່າງກັນຂອງການທົດລອງປົກກະຕິ, ເຊັ່ນ: ອຸນຫະພູມ, ຄວາມຊຸ່ມຊື່ນ.

ການທົດສອບການຂົນສົ່ງ: ການທົດສອບການສັ່ນສະເທືອນແລະການສັ່ນສະເທືອນທີ່ຮຸນແຮງສາມາດປະຕິບັດໄດ້ຕາມມາດຕະຖານຂອງສະມາຄົມການຂົນສົ່ງຄວາມປອດໄພສາກົນເພື່ອຮັບປະກັນວ່າເຄື່ອງມືສາມາດມາຮອດໃນສະພາບການດໍາເນີນງານທີ່ບໍ່ເສຍຫາຍ.

ເຂົ້າ​ໃຈ6

ການຮັບປະກັນແລະການບໍລິການສໍາລັບການບໍາລຸງຮັກສາເຄື່ອງ PCR

ເຖິງວ່າຈະມີການທົດສອບຄວາມຫນ້າເຊື່ອຖືແລະຄວາມທົນທານຢ່າງເຂັ້ມງວດ, ເຄື່ອງສູບຄວາມຮ້ອນກໍ່ມີບັນຫາດ້ານວິຊາການຕະຫຼອດຊີວິດຂອງເຄື່ອງມື.ເພື່ອຄວາມສະຫງົບ, ການຮັບປະກັນ, ການບໍລິການ, ແລະການບໍາລຸງຮັກສາຂອງຜູ້ຜະລິດຄວນພິຈາລະນາໃນເວລາຊື້ເຄື່ອງມື.

ຄວາມຢືດຢຸ່ນຂອງການບໍລິການເຊັ່ນການບໍາລຸງຮັກສາຢູ່ບ່ອນ / ກັບໄປໂຮງງານ, ການບໍລິການຕິດຕາມກວດກາຫ່າງໄກສອກຫຼີກ, ແລະເຄື່ອງມືທົດແທນໃນຂະບວນການບໍາລຸງຮັກສາ, ແລະອື່ນໆ, ເພື່ອຫຼຸດຜ່ອນຜົນກະທົບຕໍ່ປະສິດທິພາບການເຮັດວຽກ.

ໄລຍະເວລາຮັບປະກັນ, ໄລຍະເວລາຂອງການບໍລິການ, ການເຂົ້າເຖິງຂອງການສະຫນັບສະຫນູນດ້ານວິຊາການ, ແລະທັກສະຂອງພະນັກງານສະຫນັບສະຫນູນມືອາຊີບ.

ຄວາມ​ເປັນ​ໄປ​ໄດ້​ຂອງ​ການ​ຕິດ​ຕັ້ງ​ເຄື່ອງ​ມື​, ການ​ດໍາ​ເນີນ​ງານ​, ການ​ຮ່ວມ​ມື​, ແລະ​ການ​ກວດ​ສອບ​ເພື່ອ​ຕອບ​ສະ​ຫນອງ​ຄວາມ​ຕ້ອງ​ການ​ຫ້ອງ​ທົດ​ລອງ​ແລະ​ລະ​ບຽບ​ການ​ທີ່​ກ່ຽວ​ຂ້ອງ​.ບໍລິການບໍາລຸງຮັກສາເຊັ່ນ: ການກວດສອບອຸນຫະພູມ, ການທົດສອບ, ແລະການປັບທຽບແມ່ນມີຢູ່ເພື່ອຮັບປະກັນວ່າເຄື່ອງມືປະຕິບັດຢ່າງຖືກຕ້ອງກັບຕົວກໍານົດການທີ່ສອດຄ້ອງກັນ.

ຜະ​ລິດ​ຕະ​ພັນ​ທີ່​ກ່ຽວ​ຂ້ອງ:

ເຂົ້າ​ໃຈ7ເຂົ້າ​ໃຈ8


ເວລາປະກາດ: ຕຸລາ-18-2022