ເຄື່ອງ PCR|ເຈົ້າເຂົ້າໃຈແທ້ໆບໍ?
ເຕັກໂນໂລຊີ PCR ທີ່ໄດ້ຮັບລາງວັນໂນແບລ
ໃນປີ 1993, ນັກວິທະຍາສາດອາເມລິກາ Mulis ໄດ້ຮັບລາງວັນໂນແບລດ້ານເຄມີ, ແລະຜົນສໍາເລັດຂອງລາວແມ່ນການປະດິດສ້າງເຕັກໂນໂລຢີ PCR.ຄວາມມະຫັດສະຈັນຂອງເທກໂນໂລຍີ PCR ແມ່ນຢູ່ໃນລັກສະນະດັ່ງຕໍ່ໄປນີ້: ທໍາອິດ, ຈໍານວນ DNA ທີ່ຈະຂະຫຍາຍໃຫຍ່ຂື້ນແມ່ນຫນ້ອຍທີ່ສຸດ, ແລະທາງທິດສະດີຫນຶ່ງໂມເລກຸນສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອຂະຫຍາຍ;ອັນທີສອງ, ປະສິດທິພາບການຂະຫຍາຍແມ່ນສູງ, ແລະຈໍານວນຂອງ gene ເປົ້າຫມາຍແມ່ນ exponential.ການຂະຫຍາຍ, ຫຼາຍກວ່າ 10 ລ້ານເທື່ອໃນສອງສາມຊົ່ວໂມງ.ໃນປັດຈຸບັນເຄື່ອງມື PCR ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ຢ່າງກວ້າງຂວາງໃນການຄົ້ນຄວ້າວິທະຍາສາດຊີວິດແລະຫຼາຍດ້ານ.
ແບບຈໍາລອງທີ່ແຕກຕ່າງກັນ ແລະຜູ້ຜະລິດເຄື່ອງສູບຄວາມຮ້ອນສາມາດສະແດງປະສິດທິພາບ ແລະຄວາມສາມາດເຮັດຊ້ຳໄດ້ແຕກຕ່າງກັນ.ຄວາມແຕກຕ່າງເຫຼົ່ານີ້ມີຜົນກະທົບບໍ່ພຽງແຕ່ປະສິດທິພາບ PCR ແຕ່ຍັງຄວາມຖືກຕ້ອງແລະຄວາມສອດຄ່ອງຂອງຂໍ້ມູນທີ່ໄດ້ຮັບ.ຄວາມເຂົ້າໃຈລັກສະນະເຄື່ອງ PCR ສາມາດຊ່ວຍພວກເຮົາເພີ່ມຄວາມສໍາເລັດຂອງການທົດລອງຂອງພວກເຮົາໄດ້ສູງສຸດ.
ໂມດູນຄວາມຮ້ອນ
ຄວາມຖືກຕ້ອງຂອງອຸນຫະພູມຂອງວົງຈອນຄວາມຮ້ອນສາມາດເປັນການຕັດສິນໃຈສໍາລັບຄວາມສໍາເລັດຫຼືຄວາມລົ້ມເຫຼວຂອງ PCR.ຄວາມສອດຄ່ອງຂອງອຸນຫະພູມທີ່ດີຕໍ່ກັນຢູ່ໃນທ່ອນຄວາມຮ້ອນແມ່ນສໍາຄັນຕໍ່ກັບຜົນໄດ້ຮັບ PCR ທີ່ເຊື່ອຖືໄດ້ແລະສາມາດແຜ່ພັນໄດ້.
ວິທີຫນຶ່ງເພື່ອຮັບປະກັນຄວາມຖືກຕ້ອງຂອງຄວາມຮ້ອນແມ່ນການທົດສອບເລື້ອຍໆໂດຍໃຊ້ຊຸດກວດສອບອຸນຫະພູມແລະ recalibrate ຕາມຄວາມຕ້ອງການໂດຍຜູ້ຊ່ຽວຊານທີ່ໄດ້ຮັບການຝຶກອົບຮົມ.ການທົດສອບການກວດສອບອຸນຫະພູມໂດຍປົກກະຕິໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອ:
ຄວາມຖືກຕ້ອງທີ່ດີຕໍ່ກັນກັບການຕັ້ງຄ່າອຸນຫະພູມໃນຮູບແບບ isothermal
ຄວາມຖືກຕ້ອງທີ່ດີຕໍ່ກັບການຕັ້ງຄ່າອຸນຫະພູມຫຼັງຈາກການປ່ຽນແປງອຸນຫະພູມ
ຄວາມຖືກຕ້ອງຂອງອຸນຫະພູມຝາປິດ
Primer Annealing ການຄວບຄຸມອຸນຫະພູມ
ການຄວບຄຸມອຸນຫະພູມແບບ Gradient ແມ່ນຫນ້າທີ່ຂອງເຄື່ອງມື PCR ທີ່ອໍານວຍຄວາມສະດວກໃນການເພີ່ມປະສິດທິພາບຂອງ primer annealing ໃນ PCR.ຈຸດປະສົງຂອງການຕັ້ງຄ່າ gradient ແມ່ນເພື່ອບັນລຸອຸນຫະພູມທີ່ແຕກຕ່າງກັນລະຫວ່າງໂມດູນ, ແລະໂດຍ ≥2 ° C ອຸນຫະພູມເພີ່ມຂຶ້ນແລະຫຼຸດລົງລະຫວ່າງແຕ່ລະຖັນ, ອຸນຫະພູມທີ່ແຕກຕ່າງກັນສາມາດທົດສອບພ້ອມກັນເພື່ອໃຫ້ໄດ້ຮັບອຸນຫະພູມ primer annealing ທີ່ດີທີ່ສຸດ.ໃນທາງທິດສະດີ, gradient ທີ່ແທ້ຈິງບັນລຸອຸນຫະພູມເສັ້ນຊື່ລະຫວ່າງໂມດູນ.
ແນວໃດກໍ່ຕາມ, ເຄື່ອງປັ່ນຄວາມຮ້ອນແບບ gradient ທຳມະດາໂດຍທົ່ວໄປແລ້ວຈະນຳໃຊ້ທໍ່ລະບາຍຄວາມຮ້ອນອັນດຽວ ແລະ ຄວບຄຸມອຸນຫະພູມຜ່ານສອງອົງປະກອບຄວາມຮ້ອນ ແລະ ຄວາມເຢັນທີ່ຕັ້ງຢູ່ທັງສອງສົ້ນ, ມັກຈະເຮັດໃຫ້ເກີດຂໍ້ຈຳກັດຕໍ່ໄປນີ້:
ສາມາດຕັ້ງຄ່າໄດ້ພຽງແຕ່ສອງອຸນຫະພູມ: ອຸນຫະພູມສູງແລະຕ່ໍາສໍາລັບການ annealing primer ໄດ້ຖືກຕັ້ງຢູ່ໃນທັງສອງສົ້ນຂອງໂມດູນຄວາມຮ້ອນ, ແລະການຕັ້ງຄ່າທີ່ຊັດເຈນຂອງອຸນຫະພູມອື່ນໆບໍ່ສາມາດບັນລຸໄດ້ລະຫວ່າງໂມດູນ.
ເນື່ອງຈາກການແລກປ່ຽນຄວາມຮ້ອນລະຫວ່າງຖັນທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ອຸນຫະພູມລະຫວ່າງພາກພື້ນທີ່ແຕກຕ່າງກັນຢູ່ໃນໂມດູນມີແນວໂນ້ມທີ່ຈະປະຕິບັດຕາມເສັ້ນໂຄ້ງ sigmoidal ແທນທີ່ຈະເປັນ gradient linear ທີ່ແທ້ຈິງ.
ອຸນຫະພູມຕົວຢ່າງ
ຄວາມສາມາດຂອງເຄື່ອງສູບຄວາມຮ້ອນໃນການຄວບຄຸມອຸນຫະພູມຕົວຢ່າງແມ່ນມີຄວາມສໍາຄັນຫຼາຍສໍາລັບຄວາມຖືກຕ້ອງຂອງຜົນໄດ້ຮັບ PCR.ຕົວກໍານົດການສະເພາະຂອງເຄື່ອງມືເຊັ່ນ: ອັດຕາການລ້າ, ເວລາຖື, ແລະສູດການຄິດໄລ່ແມ່ນສໍາຄັນສໍາລັບການຄາດເດົາອຸນຫະພູມຕົວຢ່າງ.
ອັດຕາການໃຫ້ຄວາມຮ້ອນແລະຄວາມເຢັນຂອງເຄື່ອງ PCR ຫມາຍຄວາມວ່າອຸນຫະພູມມີການປ່ຽນແປງລະຫວ່າງຂັ້ນຕອນ PCR ທີ່ເກີດຂື້ນໃນໄລຍະເວລາທີ່ແນ່ນອນ.ເນື່ອງຈາກມັນໃຊ້ເວລາຈໍານວນທີ່ແນ່ນອນສໍາລັບຄວາມຮ້ອນທີ່ຈະໂອນຈາກໂມດູນໄປຫາຕົວຢ່າງ, ອັດຕາການໃຫ້ຄວາມຮ້ອນແລະຄວາມເຢັນຕົວຈິງຂອງຕົວຢ່າງຈະຊ້າລົງ.ດັ່ງນັ້ນ, ຄໍານິຍາມຂອງຄວາມໄວການປ່ຽນແປງອຸນຫະພູມຕ້ອງໄດ້ຮັບການຈໍາແນກແລະເຂົ້າໃຈ.
ອັດຕາຄ່າທາງລາດຂອງໂມດູນສູງສຸດ ຫຼືສູງສຸດສະແດງເຖິງການປ່ຽນແປງອຸນຫະພູມທີ່ໄວທີ່ສຸດທີ່ໂມດູນສາມາດບັນລຸໄດ້ໃນໄລຍະເວລານ້ອຍຫຼາຍໃນລະຫວ່າງທາງລາດ.
ອັດຕາຕັນທາງຍ່າງສະເລ່ຍສະແດງເຖິງອັດຕາການປ່ຽນແປງຂອງອຸນຫະພູມໃນໄລຍະເວລາທີ່ຍາວກວ່າແລະຈະສະຫນອງມາດຕະການທີ່ເປັນຕົວແທນຂອງຄວາມໄວເຄື່ອງ PCR ຫຼາຍຂຶ້ນ.
ອັດຕາການໃຫ້ຄວາມຮ້ອນແລະຄວາມເຢັນຂອງຕົວຢ່າງສູງສຸດແລະອັດຕາການໃຫ້ຄວາມຮ້ອນຂອງຕົວຢ່າງສະເລ່ຍແລະຄວາມເຢັນສະທ້ອນໃຫ້ເຫັນເຖິງອຸນຫະພູມຕົວຈິງທີ່ໄດ້ຮັບໂດຍຕົວຢ່າງ.ອັດຕາການໃຫ້ຄວາມຮ້ອນຂອງຕົວຢ່າງແລະຄວາມເຢັນຈະສະຫນອງການປຽບທຽບທີ່ຖືກຕ້ອງກວ່າຂອງການປະຕິບັດຂອງເຄື່ອງ PCR ແລະຜົນກະທົບທີ່ອາດມີຕໍ່ຜົນໄດ້ຮັບ PCR.
ເມື່ອປະຕິບັດການທົດແທນ cycler, ມັນແນະນໍາໃຫ້ໃຊ້ເຄື່ອງມືທີ່ມີໂຄງການອັດຕາການລ້າທີ່ຈໍາລອງຮູບແບບທີ່ຜ່ານມາສໍາລັບການທົດແທນທີ່ງ່າຍກວ່າແລະມີຜົນກະທົບຫນ້ອຍທີ່ສຸດຕໍ່ PCR repeatability.
ເຄື່ອງສູບຄວາມຮ້ອນຄວນຖືກອອກແບບຕາມຂັ້ນຕອນພຽງແຕ່ຫຼັງຈາກຕົວຢ່າງຮອດອຸນຫະພູມທີ່ກໍານົດໄວ້.ດ້ວຍວິທີນີ້, ເວລາທີ່ຕົວຢ່າງຖືກຮັກສາໄວ້ໃນອຸນຫະພູມທີ່ກໍານົດໄວ້ຈະຖືກຮັກສາໄວ້ຢ່າງຖືກຕ້ອງກັບເງື່ອນໄຂວົງຈອນທີ່ສອດຄ້ອງກັນທີ່ຕ້ອງການໃນຂະບວນການປະຕິບັດງານ.
ເຄື່ອງຈັກລະບາຍຄວາມຮ້ອນມັກຈະໃຊ້ສູດການຄິດໄລ່ທາງຄະນິດສາດທີ່ຊັບຊ້ອນເພື່ອຮັບປະກັນວ່າຕົວຢ່າງສາມາດເຂົ້າຫາອຸນຫະພູມທີ່ຕັ້ງໄວ້ໄດ້ໄວຕາມໂຄງການທີ່ຕັ້ງໄວ້ລ່ວງໜ້າ.ອີງຕາມປະລິມານຂອງລະບົບຕິກິຣິຍາແລະຄວາມຫນາຂອງພາດສະຕິກ PCR ທີ່ໃຊ້, ສູດການຄິດໄລ່ສາມາດຄາດຄະເນອຸນຫະພູມຂອງຕົວຢ່າງແລະເວລາທີ່ຈະບັນລຸອຸນຫະພູມທີ່ກໍານົດໄວ້.ອີງໃສ່ສູດການຄິດໄລ່ເຫຼົ່ານີ້, ໃນລະຫວ່າງຂະບວນການເຮັດຄວາມຮ້ອນຫຼືຄວາມເຢັນຂອງວົງຈອນຄວາມຮ້ອນ, ອຸນຫະພູມຕັນມັກຈະເກີນຄ່າທີ່ກໍານົດໄວ້ໂດຍຜ່ານຂະບວນການທີ່ເອີ້ນວ່າການ overshoot ຕັນຄວາມຮ້ອນຫຼື undershoot.ການຕິດຕັ້ງດັ່ງກ່າວຮັບປະກັນວ່າຕົວຢ່າງເຖິງອຸນຫະພູມທີ່ກໍານົດໄວ້ໄວເທົ່າທີ່ຈະໄວໄດ້ໂດຍບໍ່ມີການ overshooting ຫຼື undershooting ຕົວຂອງມັນເອງ.
ຜ່ານການທົດລອງ
ປັດໃຈທີ່ສາມາດເພີ່ມການສົ່ງກະແສໄຟຟ້າຂອງເຄື່ອງຈັກລະບາຍຄວາມຮ້ອນລວມມີອັດຕາທາງລາດ, ການຕັ້ງຄ່າບລັອກຄວາມຮ້ອນ, ແລະການລວມຕົວຂອງລະບົບອັດຕະໂນມັດ.
ອັດຕາການໃຫ້ຄວາມຮ້ອນແລະຄວາມເຢັນຂອງວົງຈອນຄວາມຮ້ອນສະແດງເຖິງຄວາມໄວທີ່ມັນໄປຮອດອຸນຫະພູມທີ່ກໍານົດໄວ້.ອຸນຫະພູມເພີ່ມຂຶ້ນແລະຫຼຸດລົງໄວ, PCR ຈະແລ່ນໄວຂຶ້ນ, ຊຶ່ງຫມາຍຄວາມວ່າການທົດລອງສາມາດສໍາເລັດໄດ້ໃນໄລຍະເວລາທີ່ກໍານົດໄວ້.ນອກຈາກນັ້ນ, ການທົດລອງສາມາດເລັ່ງໄດ້ໂດຍໃຊ້ DNA polymerases ທີ່ໄວຂຶ້ນ.
ການອອກແບບຂອງໂມດູນ cycler ຄວາມຮ້ອນແມ່ນຍັງສໍາຄັນສໍາລັບການທົດລອງ PCR.ຕົວຢ່າງ, ໂມດູນທີ່ສາມາດທົດແທນໄດ້ອະນຸຍາດໃຫ້ມີຄວາມຍືດຫຍຸ່ນໃນຈໍານວນຕົວຢ່າງຕໍ່ແລ່ນ.ນອກຈາກນັ້ນ, ໂມດູນການໃຫ້ຄວາມຮ້ອນທີ່ມີໂມດູນທີ່ສາມາດຄວບຄຸມໄດ້ສ່ວນບຸກຄົນແມ່ນເຫມາະສົມສໍາລັບການດໍາເນີນໂຄງການ PCR ທີ່ແຕກຕ່າງກັນພ້ອມກັນໃນຫນຶ່ງ cycler ຄວາມຮ້ອນ.
ສໍາລັບ PCR ທີ່ມີຄວາມໄວສູງອັດຕະໂນມັດ, ຊອບແວທີ່ຄວບຄຸມລະບົບການຈັດການທໍ່ຄວນຈະເປັນໂຄງການແລະເຂົ້າກັນໄດ້.ລະບົບອັດຕະໂນມັດແມ່ນເຫມາະສົມສໍາລັບການປະຕິບັດປະຕິກິລິຍາ PCR ທີ່ມີຄວາມໄວສູງເພາະວ່າພວກເຂົາສາມາດດໍາເນີນການຢ່າງຕໍ່ເນື່ອງດ້ວຍການແຊກແຊງຂອງມະນຸດພຽງເລັກນ້ອຍ, ດັ່ງນັ້ນການຫຼຸດຜ່ອນເວລາທີ່ຕ້ອງການສໍາລັບການຕິດຕັ້ງແບບທົດລອງຄູ່ມືແລະການເພີ່ມຈໍານວນຂອງຕິກິຣິຍາໃນໄລຍະເວລາໃດຫນຶ່ງ.
ຄວາມຫນ້າເຊື່ອຖື, ຄວາມທົນທານແລະການຮັບປະກັນຄຸນນະພາບຂອງເຄື່ອງສູບຄວາມຮ້ອນ
ນອກ ເໜືອ ໄປຈາກປະສິດທິພາບແລະຄວາມສາມາດໃນການສົ່ງຜ່ານ, ເຄື່ອງ PCR ຍັງສາມາດທົນກັບການນໍາໃຊ້ຊ້ໍາຊ້ອນບາງຢ່າງ, ຄວາມກົດດັນດ້ານສິ່ງແວດລ້ອມ, ແລະເງື່ອນໄຂການຂົນສົ່ງ.ຜູ້ຜະລິດບາງຄົນອາດຈະລາຍງານກ່ຽວກັບວິທີການປະຕິບັດການທົດສອບຄວາມຫນ້າເຊື່ອຖືແລະຄວາມທົນທານ.ການກວດຫາເຄື່ອງມື PCR ທີ່ສອດຄ້ອງກັນປະກອບມີ:
ຄວາມຫນ້າເຊື່ອຖື: ເຄື່ອງເຈາະກົນຈັກຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອເຮັດການທົດສອບຊ້ໍາຊ້ອນກ່ຽວກັບອົງປະກອບຂອງເຄື່ອງມືທີ່ໃຊ້ເລື້ອຍໆເຊັ່ນຝາປິດຄວາມຮ້ອນ, ແຜງຄວບຄຸມ / ຫນ້າຈໍສໍາຜັດ, ແລະໂມດູນການຮອບວຽນອຸນຫະພູມ.
ຄວາມກົດດັນອາກາດລ້ອມຮອບ: ຫ້ອງສະພາບແວດລ້ອມສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອຈໍາລອງສະພາບທີ່ແຕກຕ່າງກັນຂອງການທົດລອງປົກກະຕິ, ເຊັ່ນ: ອຸນຫະພູມ, ຄວາມຊຸ່ມຊື່ນ.
ການທົດສອບການຂົນສົ່ງ: ການທົດສອບການສັ່ນສະເທືອນແລະການສັ່ນສະເທືອນທີ່ຮຸນແຮງສາມາດປະຕິບັດໄດ້ຕາມມາດຕະຖານຂອງສະມາຄົມການຂົນສົ່ງຄວາມປອດໄພສາກົນເພື່ອຮັບປະກັນວ່າເຄື່ອງມືສາມາດມາຮອດໃນສະພາບການດໍາເນີນງານທີ່ບໍ່ເສຍຫາຍ.
ການຮັບປະກັນແລະການບໍລິການສໍາລັບການບໍາລຸງຮັກສາເຄື່ອງ PCR
ເຖິງວ່າຈະມີການທົດສອບຄວາມຫນ້າເຊື່ອຖືແລະຄວາມທົນທານຢ່າງເຂັ້ມງວດ, ເຄື່ອງສູບຄວາມຮ້ອນກໍ່ມີບັນຫາດ້ານວິຊາການຕະຫຼອດຊີວິດຂອງເຄື່ອງມື.ເພື່ອຄວາມສະຫງົບ, ການຮັບປະກັນ, ການບໍລິການ, ແລະການບໍາລຸງຮັກສາຂອງຜູ້ຜະລິດຄວນພິຈາລະນາໃນເວລາຊື້ເຄື່ອງມື.
ຄວາມຢືດຢຸ່ນຂອງການບໍລິການເຊັ່ນການບໍາລຸງຮັກສາຢູ່ບ່ອນ / ກັບໄປໂຮງງານ, ການບໍລິການຕິດຕາມກວດກາຫ່າງໄກສອກຫຼີກ, ແລະເຄື່ອງມືທົດແທນໃນຂະບວນການບໍາລຸງຮັກສາ, ແລະອື່ນໆ, ເພື່ອຫຼຸດຜ່ອນຜົນກະທົບຕໍ່ປະສິດທິພາບການເຮັດວຽກ.
ໄລຍະເວລາຮັບປະກັນ, ໄລຍະເວລາຂອງການບໍລິການ, ການເຂົ້າເຖິງຂອງການສະຫນັບສະຫນູນດ້ານວິຊາການ, ແລະທັກສະຂອງພະນັກງານສະຫນັບສະຫນູນມືອາຊີບ.
ຄວາມເປັນໄປໄດ້ຂອງການຕິດຕັ້ງເຄື່ອງມື, ການດໍາເນີນງານ, ການຮ່ວມມື, ແລະການກວດສອບເພື່ອຕອບສະຫນອງຄວາມຕ້ອງການຫ້ອງທົດລອງແລະລະບຽບການທີ່ກ່ຽວຂ້ອງ.ບໍລິການບໍາລຸງຮັກສາເຊັ່ນ: ການກວດສອບອຸນຫະພູມ, ການທົດສອບ, ແລະການປັບທຽບແມ່ນມີຢູ່ເພື່ອຮັບປະກັນວ່າເຄື່ອງມືປະຕິບັດຢ່າງຖືກຕ້ອງກັບຕົວກໍານົດການທີ່ສອດຄ້ອງກັນ.
ຜະລິດຕະພັນທີ່ກ່ຽວຂ້ອງ:
ເວລາປະກາດ: ຕຸລາ-18-2022