ການວິເຄາະຕໍ່ໄປນີ້ຂອງບັນຫາທີ່ເປັນໄປໄດ້ໃນBuccalswab/FTA card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.
ຖັນການຊໍາລະລ້າງໄດ້ຖືກອຸດຕັນ
ໃນຊຸດນີ້, ໃນການປະຕິບັດການສະກັດເອົາ DNA ພັນທຸ ກຳ, ຖັນການ ຊຳ ລະລ້າງແມ່ນຖືກດູດຊຶມໂດຍກົງໃສ່ສ່ວນປະສົມຂອງທາດ enzymatic lysis ໂດຍບໍ່ມີຂັ້ນຕອນການ centrifugation, ແລະຖັນການ purification ອາດຈະຖືກສະກັດເນື່ອງຈາກ enzymization ບໍ່ຄົບຖ້ວນແລະຄວາມຫນືດສູງຂອງຕົວຢ່າງ.
ສາເຫດທີ່ເປັນໄປໄດ້ດັ່ງຕໍ່ໄປນີ້:
1. ການຍ່ອຍອາຫານຂອງ enzymatic ບໍ່ຄົບຖ້ວນຂອງຕົວຢ່າງເນື້ອເຍື່ອ.
ຄໍາແນະນໍາ: ເວລາການປຸງແຕ່ງຕົວຢ່າງຂອງ Foregene Protease ສາມາດຂະຫຍາຍໄດ້ຢ່າງເຫມາະສົມຫຼື supernatant ສາມາດໄດ້ຮັບການປະຕິບັດຫຼັງຈາກ centrifugation ທີ່ 12,000 rpm (~13,400.× g) ສໍາລັບ 5 ນາທີ.
2. ການນໍາໃຊ້ຕົວຢ່າງເນື້ອເຍື່ອຫຼາຍເກີນໄປຫຼືເນື້ອເຍື່ອຂະຫນາດໃຫຍ່.
ຄໍາແນະນໍາ: ມັນດີທີ່ສຸດທີ່ຈະບໍ່ເກີນ 1Buccal swab ໃນຕົວຢ່າງ;ຖ້າຕົວຢ່າງມີຂະຫນາດໃຫຍ່ເກີນໄປ, ໃຫ້ເພີ່ມປະລິມານ Buffer ST1, Foregene Protease, buffer ST2 ຕາມຄວາມເຫມາະສົມ.
3. ຄວາມຫນືດຂອງຕົວຢ່າງແມ່ນສູງເກີນໄປ.
ຄໍາແນະນໍາ: ຕົວຢ່າງສາມາດຖືກເຈືອຈາງຢ່າງເຫມາະສົມດ້ວຍ 10 mM ຂອງ Tris-HCl ກ່ອນທີ່ຈະສະກັດ DNA genomic.
4. ຊິ້ນສ່ວນຂອງບັດເລືອດໄດ້ຖືກດູດ.
ຄໍາແນະນໍາ: ເວລາ centrifugation ຊົ່ວຄາວຂອງຂັ້ນຕອນ 6 ຂອງການສະກັດເອົາ genomic ຈຸດເລືອດ (FTA Card) ສາມາດຂະຫຍາຍໄດ້ຢ່າງເໝາະສົມ.
ຜົນຜະລິດຕໍ່າຫຼືບໍ່ມີ DNA
ມັກຈະມີຫຼາຍປັດໃຈທີ່ມີຜົນກະທົບຕໍ່ຜົນຜະລິດຂອງ DNA, ລວມທັງຕົ້ນກໍາເນີດຂອງຕົວຢ່າງ, ເງື່ອນໄຂການເກັບຮັກສາຕົວຢ່າງ, ການກະກຽມຕົວຢ່າງ, ການຫມູນໃຊ້, ແລະອື່ນໆ.
DNA ພັນທຸ ກຳ ບໍ່ສາມາດໄດ້ຮັບໃນລະຫວ່າງການສະກັດເອົາ
ສາເຫດທີ່ເປັນໄປໄດ້ມີດັ່ງນີ້:
1. ການເກັບຮັກສາຕົວຢ່າງບໍ່ຖືກຕ້ອງ ຫຼື ການເກັບຮັກສາໄວ້ດົນເກີນໄປເຮັດໃຫ້ການເສື່ອມສະພາບຂອງ DNA ພັນທຸ ກຳ.
ຄໍາແນະນໍາ: ຊ່ອງປາກຄວນຖືກເອົາຕົວຢ່າງສົດໆ, ແລະມັນບໍ່ໄດ້ຖືກແນະນໍາໃຫ້ໃຊ້ swabs ເກັບຮັກສາໄວ້ສໍາລັບການດໍາເນີນການສະກັດ DNA ຂອງ genomic;ຕົວຢ່າງຈຸດເລືອດຄວນຮັບປະກັນວ່າມີຄຸນນະພາບແລະເວລາເກັບຮັກສາບໍ່ຄວນຍາວເກີນໄປ.
2. ການໃຊ້ເນື້ອເຍື່ອໜ້ອຍເກີນໄປອາດເຮັດໃຫ້ບໍ່ມີການສະກັດເອົາ DNA ພັນທຸ ກຳ ທີ່ສອດຄ້ອງກັນ.
ຄໍາແນະນໍາ: ປະຕິບັດຕາມບັກກາl ຄໍາແນະນໍາການເກັບຕົວຢ່າງ swab ໃນຄູ່ມືການດໍາເນີນງານ, ແລະເຊັດໃຫ້ຫຼາຍເທົ່າທີ່ເປັນໄປໄດ້ເພື່ອໃຫ້ຈຸລັງພຽງພໍສາມາດຕິດກັບ swab ປາກສໍາລັບການສະກັດເອົາ DNA genomic;ສໍາລັບການສະກັດເອົາຕົວຢ່າງຈຸດເລືອດ, ພື້ນທີ່ຕັດເລືອດສາມາດເພີ່ມຂຶ້ນຢ່າງເຫມາະສົມ.
3. Foregene Protease ຖືກຮັກສາໄວ້ຢ່າງບໍ່ຖືກຕ້ອງ, ເຮັດໃຫ້ເກີດການຫຼຸດລົງຂອງກິດຈະກໍາຫຼື inactivation ຂອງມັນ.
ຄໍາແນະນໍາ: ຢືນຢັນເງື່ອນໄຂການເກັບຮັກສາຂອງForegene Protease ຫຼືທົດແທນມັນດ້ວຍ Foregene Protease ໃໝ່ ສໍາລັບປະຕິກິລິຍາ enzymatic.
4. ການເກັບຮັກສາຊຸດທີ່ບໍ່ເຫມາະສົມຫຼືເວລາເກັບຮັກສາໄວ້ດົນເກີນໄປ, ເຮັດໃຫ້ເກີດຄວາມລົ້ມເຫຼວຂອງສ່ວນປະກອບບາງຢ່າງໃນຊຸດ.
ຄໍາແນະນໍາ: ຊື້ໃຫມ່Buccal swab DNAການແຍກດ່ຽວ ຊຸດສໍາລັບຂັ້ນຕອນທີ່ກ່ຽວຂ້ອງ.
5. Buffer WB ບໍ່ເພີ່ມເອທານອນຢ່າງແທ້ຈິງ.
ຄໍາແນະນໍາ: ຢືນຢັນວ່າ buffer WB ເພີ່ມປະລິມານທີ່ຖືກຕ້ອງຂອງເອທານອນຢ່າງແທ້ຈິງ.
6. eluent ບໍ່ໄດ້ຖືກເພີ່ມຢ່າງຖືກຕ້ອງກັບຮູບເງົາຊິລິໂຄນ.
ຄໍາແນະນໍາ: ເພີ່ມ 65°Cpre-warmed eluent ລຸດລົງໃສ່ກາງຂອງເຍື່ອຊິລິໂຄນແລະປະໄວ້ຢູ່ໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງສໍາລັບ 5 ນາທີເພື່ອເພີ່ມປະສິດທິພາບ elution.
Low-yield DNA ພັນທຸ ກຳ ໂດດດ່ຽວ
ສາເຫດທີ່ເປັນໄປໄດ້ດັ່ງຕໍ່ໄປນີ້:
1. ການເກັບຮັກສາຕົວຢ່າງບໍ່ຖືກຕ້ອງ ຫຼື ການເກັບຮັກສາໄວ້ດົນເກີນໄປເຮັດໃຫ້ການເສື່ອມສະພາບຂອງ DNA ພັນທຸ ກຳ.
ຄຳແນະນຳ: ຜ້າພັນປາກແມ່ນມັກເປັນຕົວຢ່າງສົດໆ, ແລະຜ້າເຊັດປາກທີ່ຮັກສາໄວ້ບໍ່ຄວນໃຊ້ເພື່ອສະກັດ DNA ພັນທຸ ກຳ.
2. ຖ້າຈໍານວນຕົວຢ່າງຂອງເນື້ອເຍື່ອມີຂະຫນາດນ້ອຍເກີນໄປ, ເນື້ອໃນ DNA genomic ທີ່ສະກັດອອກມາຈະຫນ້ອຍລົງ.
ຄໍາແນະນໍາ: ປະຕິບັດຕາມຄໍາແນະນໍາການເກັບຕົວຢ່າງ swab ປາກໃນຄູ່ມືປະຕິບັດງານ, ເຊັດໃຫ້ຫຼາຍຄັ້ງເທົ່າທີ່ເປັນໄປໄດ້ເພື່ອໃຫ້ຈຸລັງພຽງພໍສາມາດຕິດກັບ swab ປາກສໍາລັບການສະກັດ DNA genomic.
3. Foregene Protease ຖືກຮັກສາໄວ້ຢ່າງບໍ່ຖືກຕ້ອງ, ເຮັດໃຫ້ເກີດການຫຼຸດລົງຂອງກິດຈະກໍາຫຼື inactivation ຂອງມັນ.
ຄໍາແນະນໍາ: ຢືນຢັນເງື່ອນໄຂການເກັບຮັກສາຂອງthe Foregene Protease ຫຼືທົດແທນມັນດ້ວຍໃຫມ່ Foregene Protease ສໍາລັບປະຕິກິລິຍາ enzymatic.
4. ບັນຫາທີ່ອຸດົມສົມບູນ.
ຄໍາແນະນໍາ: ໃຊ້ Buffer EB ສໍາລັບ elution;ຖ້າໃຊ້ ddH2O ຫຼື eluents ອື່ນໆ, ຢືນຢັນວ່າ pH ຂອງ eluate ແມ່ນລະຫວ່າງ 7.0-8.5.
5. eluate ບໍ່ໄດ້ຖືກເພີ່ມຢ່າງຖືກຕ້ອງ dropwise.
ຄໍາແນະນໍາ: ຕື່ມຢອດ eluent ໃສ່ກາງຂອງເຍື່ອຊິລິໂຄນແລະປະໄວ້ຢູ່ໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງສໍາລັບ 5 ນາທີເພື່ອເພີ່ມປະສິດທິພາບ elution.
6. ທາດແຫຼວທີ່ລະບາຍອອກໄດ້ສະສົມໜ້ອຍເກີນໄປ.
ຄໍາແນະນໍາ: ໃຊ້ eluent ສໍາລັບ elution DNA genomic ຕາມຄວາມຕ້ອງການໃນຄໍາແນະນໍາ, ຢ່າງຫນ້ອຍບໍ່ຫນ້ອຍ ຫຼາຍກວ່າ 15μl.
Lໂອ້ ຄວາມບໍລິສຸດ of DNA ພັນທຸ ກຳໂດດດ່ຽວ
ຄວາມບໍລິສຸດຂອງ DNA ພັນທຸ ກຳ ຕ່ໍາສາມາດນໍາໄປສູ່ຄວາມລົ້ມເຫຼວຫຼືຜົນໄດ້ຮັບທີ່ບໍ່ຫນ້າພໍໃຈຂອງການທົດລອງທາງລຸ່ມ, ເຊັ່ນ: enzymes ບໍ່ສາມາດຖືກຕັດອອກ, PCR ບໍ່ສາມາດໄດ້ຮັບຊິ້ນສ່ວນ gene ຂອງຄວາມສົນໃຈ, ແລະອື່ນໆ.
ສາເຫດທີ່ເປັນໄປໄດ້ມີດັ່ງນີ້:
1. ມົນລະພິດ Heteroprotein, ມົນລະພິດ RNA.
ການວິເຄາະ: ຖັນການເຮັດຄວາມສະອາດບໍ່ໄດ້ຖືກລ້າງໂດຍໃຊ້ Buffer PW;ຖັນ Buffer PW wash purification ບໍ່ໄດ້ຖືກລ້າງໂດຍໃຊ້ຄວາມໄວ centrifugal ທີ່ຖືກຕ້ອງ.
ຄໍາແນະນໍາ: ໃຫ້ແນ່ໃຈວ່າບໍ່ມີ precipitation ໃນ supernatant ກ່ອນທີ່ຈະເພີ່ມ ethanol;ໃຫ້ແນ່ໃຈວ່າລ້າງຄໍລໍາເຮັດຄວາມສະອາດຕາມຄໍາແນະນໍາ, ແລະຂັ້ນຕອນນີ້ບໍ່ສາມາດຖືກຍົກເລີກ.
2. ມົນລະພິດ ion impurity.
ການວິເຄາະ: ຖັນ Buffer WB wash purification ໄດ້ຖືກລະເວັ້ນຫຼືລ້າງພຽງແຕ່ຄັ້ງດຽວ, ສົ່ງຜົນໃຫ້ມີການປົນເປື້ອນ ionic ຕົກຄ້າງ.
ຄໍາແນະນໍາ: ໃຫ້ແນ່ໃຈວ່າລ້າງ Buffer WB 2 ເທື່ອຕາມຄໍາແນະນໍາເພື່ອເອົາ ions ທີ່ຕົກຄ້າງອອກຫຼາຍເທົ່າທີ່ເປັນໄປໄດ້.
3. ການປົນເປື້ອນ enzyme RNA.
ການວິເຄາະ: RNases ຕ່າງປະເທດໄດ້ຖືກເພີ່ມເຂົ້າໃນ buffer;ການປະຕິບັດການລ້າງ Buffer PW ບໍ່ຖືກຕ້ອງ, ສົ່ງຜົນໃຫ້ RNase ຕົກຄ້າງ, ຜົນກະທົບຕໍ່ການປະຕິບັດການທົດລອງ RNA ລຸ່ມ, ເຊັ່ນ in vitro transcription.
ຄໍາແນະນໍາ: Foregene series ອາຊິດ nucleicໄອໂຊລາຊຸດ tion ສາມາດເອົາ RNA ໂດຍບໍ່ມີການເພີ່ມ RNase,ດັ່ງນັ້ນ buccal Swab/FTA ບັດຊຸດ DNA isolationຕ້ອງການ't ເພີ່ມ RNase;ໃຫ້ແນ່ໃຈວ່າປະຕິບັດຕາມຄໍາແນະນໍາສໍາລັບຄໍລໍາລ້າງ Buffer PW, ແລະຂັ້ນຕອນນີ້ບໍ່ສາມາດຖືກລະເວັ້ນ.
4. ສານຕົກຄ້າງ Ethanol.
ການວິເຄາະ: Buffer WB ບໍ່ໄດ້ດໍາເນີນການ centrifugation ທໍ່ເປົ່າຫຼັງຈາກການລ້າງຖັນການຊໍາລະລ້າງ.
ຄໍາແນະນໍາ: ດໍາເນີນການ centrifugation ທໍ່ເປົ່າທີ່ຖືກຕ້ອງຕາມຄໍາແນະນໍາ.
5. ມົນລະພິດ impurity ອື່ນໆ.
ການວິເຄາະ: ຕົວຢ່າງທີ່ບັນທຶກໄວ້ຫຼືຕົວຢ່າງພິເສດແມ່ນບໍ່ໄດ້ pretreated.
ຄໍາແນະນໍາ: ຢ່າງລະອຽດ pretreat ຕົວຢ່າງຕາມຄໍາແນະນໍາ.
ເວລາປະກາດ: 18-03-2022
