RNase ເປັນຄໍາທີ່ລະອຽດອ່ອນທີ່ນັກຮຽນຫຼາຍຄົນທີ່ມັກຈະດໍາເນີນການທົດລອງການສະກັດເອົາ RNA ບໍ່ຕ້ອງການໄດ້ຍິນ.ປະກອບອາວຸດຢ່າງເຕັມສ່ວນ, RNA ທີ່ຖືກສະກັດອອກດ້ວຍສານ phenol ແລະ chloroform ທີ່ເປັນພິດສູງໄດ້ຖືກທໍາລາຍ.ຂ້າ​ພະ​ເຈົ້າ​ບໍ່​ໄດ້​ຄືນ​ດີ​!!!ມື້ນີ້, ຂໍໃຫ້ພິຈາລະນາຕົ້ນກໍາເນີດຂອງ Rnase ທີ່ມີຊື່ສຽງ.

Ribonuclease (RNase), ຫຼື RNase, ເປັນ nuclease ທີ່ສາມາດ hydrolyze RNA ເຂົ້າໄປໃນໂມເລກຸນຂະຫນາດນ້ອຍ.RNase, ເປັນທາດໂປຼຕີນຈາກໂມເລກຸນຂະຫນາດນ້ອຍ, ມີຄວາມຫມັ້ນຄົງຜິດປົກກະຕິ .ການຂ້າເຊື້ອດ້ວຍອຸນຫະພູມສູງ ແລະຄວາມກົດດັນສູງແບບດັ້ງເດີມ ແລະຕົວຍັບຍັ້ງທາດໂປຼຕີນບໍ່ສາມາດກະຕຸ້ນມັນໄດ້ຢ່າງສົມບູນ.ຄວາມຫມັ້ນຄົງຂອງ RNase ສ່ວນໃຫຍ່ແມ່ນມາຈາກພັນທະບັດ disulfide ໃນໂຄງສ້າງ.ສໍາລັບຕົວຢ່າງ, RNase ທີ່ໃຊ້ທົ່ວໄປຂອງ pancreas bovine ມີພຽງແຕ່ 124 ອາຊິດ amino, ແຕ່ມີ 4 ພັນທະບັດ disulfide.ພັນທະບັດ sulfur ແລະ disulfide bond endow RNase ທີ່ມີຄວາມຫມັ້ນຄົງດ້ານຄວາມຮ້ອນທີ່ດີເລີດ.ນອກຈາກນັ້ນ, rnase ມີນ້ໍາຫນັກໂມເລກຸນຂ້ອນຂ້າງນ້ອຍແລະສາມາດຟື້ນຟູຄວາມສອດຄ່ອງເດີມຂອງມັນຢ່າງໄວວາໃນຫຼາຍໆກໍລະນີ.

ນອກ​ເຫນືອ​ໄປ​ຈາກ​ຄວາມ​ຫມັ້ນ​ຄົງ​ທີ່​ສຸດ​,RNases ແມ່ນຢູ່ທົ່ວທຸກແຫ່ງໃນຫ້ອງທົດລອງ .RNase ແມ່ນກົນໄກການປ້ອງກັນທາງຊີວະພາບ.ສໍາລັບເຊນ, RNA exogenous ມັກຈະຕາຍ.ເມື່ອປຽບທຽບກັບ DNA exogenous, RNA exogenous ມັກຈະເປັນອັນຕະລາຍຫຼາຍ.RNA ຖືກຖອດຂໍ້ຄວາມແລະແປຢ່າງມີຄວາມສຸກ, ດັ່ງນັ້ນເກືອບທຸກສິ່ງມີຊີວິດໄດ້ພັດທະນາ RNases ເພື່ອປ້ອງກັນການຮຸກຮານຂອງ RNA ພາຍນອກ.ດັ່ງນັ້ນ, ຈຸລັງເຊື້ອແບັກທີເຣັຍທີ່ປູກຢູ່ໃນຫ້ອງທົດລອງແລະທ່ານຜູ້ທີ່ສະກັດ RNA exude ກິ່ນຫອມຂອງ RNase.ນ້ໍາໃນຮ່າງກາຍຂອງມະນຸດ (ນໍ້າລາຍ, ນໍ້າຕາ, ແລະອື່ນໆ) ມີຈໍານວນ RNase, ດັ່ງນັ້ນຢ່າຮ້ອງໄຫ້ເມື່ອ RNA ຖືກທໍາລາຍ.ຍິ່ງເຈົ້າຮ້ອງໄຫ້ຍິ່ງເຮັດໃຫ້ RNA ເສື່ອມໂຊມ!!ເອື້ອຍ Daiyu ບໍ່ເຫມາະສົມກັບການສະກັດ RNA!

ນອກຈາກນັ້ນ, ຜິວຫນັງທີ່ອ່ອນໂຍນຂອງທ່ານຍັງມີ RNase ຫຼາຍ, ແລະເຄື່ອງຫມາຍ, pipettes, ປະຕູຕູ້ເຢັນ, ແລະມືຈັບປະຕູທີ່ຖືກສໍາຜັດກັບຜິວຫນັງຍັງມີ RNase.

ດ້ວຍການ rambling ຫຼາຍ, ໃຫ້ພວກເຮົາພິຈາລະນາວິທີການຈັດການກັບ RNases.

ສິ່ງທໍາອິດທີ່ທຸກຄົນຄິດເຖິງເມື່ອເອົາ RNA ອອກແມ່ນDEPC(Diethyl pyrocarbonate).DEPC ສ່ວນໃຫຍ່ແມ່ນ denatures ທາດໂປຼຕີນໂດຍການສົມທົບກັບວົງ imidazole ຂອງກຸ່ມ RNase active histidine, ດັ່ງນັ້ນ inhibiting ກິດຈະກໍາຂອງ enzyme ໄດ້.0.1% DEPC ສາມາດມີຜົນກະທົບການໂຍກຍ້າຍທີ່ດີກວ່າກ່ຽວກັບ Rnase, ແຕ່ພວກເຮົາຈໍາເປັນຕ້ອງໄດ້ເອົາໃຈໃສ່ວ່າ DEPC ເປັນ carcinogen ເປັນທີ່ຮູ້ຈັກ, ສະນັ້ນຄວນເອົາໃຈໃສ່ເປັນພິເສດໃນເວລານໍາໃຊ້ມັນ.

ສໍາລັບ RNase, ພວກເຮົາຈໍາເປັນຕ້ອງເລີ່ມຕົ້ນຈາກສອງດ້ານ,ອັນທໍາອິດແມ່ນການຍັບຍັ້ງກິດຈະກໍາຂອງ RNase endogenous

ສານສະກັດຈາກ RNA ທໍາມະດາເຊັ່ນ guanidine isothiocyanate ແລະ DTT ທີ່ມີຢູ່ໃນ Trizol ສາມາດເປີດພັນທະບັດ disulfide ຂອງ RNase, ແຕ່ຍັງມີບາງ RNases, ໂດຍສະເພາະໃນຕົວຢ່າງຂອງເນື້ອເຍື່ອ, ດັ່ງນັ້ນຈົ່ງເອົາໃຈໃສ່ກັບອຸນຫະພູມຕ່ໍາ.

1.ເອົາຕົວຢ່າງເນື້ອເຍື່ອເຂົ້າໄປໃນທາດໄນໂຕຣເຈນຂອງແຫຼວທັນທີຫຼັງຈາກເອົາມັນອອກ, ຫຼືໃນການແກ້ໄຂການເກັບຮັກສາ RNA ທາງດ້ານການຄ້າ.

2.ຫຼັງຈາກການສະກັດເອົາ RNA ຂອງຕົວຢ່າງເຊນ, ເພີ່ມມັນໃສ່ການແກ້ໄຂ lysis ແລະ lyse ມັນໃສ່ກ່ອງກ້ອນ.

3. ມັນດີທີ່ສຸດທີ່ຈະໃຊ້ໄນໂຕຣເຈນຂອງແຫຼວສໍາລັບການຂັດ ເມື່ອຕົວຢ່າງເນື້ອເຍື່ອແມ່ນ homogenized.ເມື່ອໃຊ້ເຄື່ອງປະສົມໄຟຟ້າໂດຍບໍ່ມີທາດໄນໂຕຣເຈນຂອງແຫຼວ, ໃຫ້ເອົາໃຈໃສ່ກັບການເຮັດໃຫ້ອະແດບເຕີ homogenate ກ່ອນຄວາມເຢັນຢ່າງເຕັມສ່ວນ.

ອັນທີສອງແມ່ນ DNase exogenous

1.ຈົ່ງປະກອບອາວຸດໃຫ້ເຕັມທີ່, ໃສ່ເສື້ອຄຸມຫ້ອງທົດລອງ, ໃສ່ຫນ້າກາກ, ແລະໃຫ້ແນ່ໃຈວ່າໄດ້ໃສ່ຖົງມືໃຫມ່ (ຢ່າຟ້າວຫຼາຍ !! ຄວນສັງເກດວ່າ Trizol ແມ່ນສານຕ້ານອະນຸມູນອິດສະຫລະ, ແລະມັນຍັງແຂງແຮງຫຼາຍຜ່ານຖົງມື, ດັ່ງນັ້ນຢ່າປຽກໃສ່ມື).

2.ທຸກໆຄໍາແນະນໍາ pipette ທີ່ໃຊ້, ທໍ່ EP, ທໍ່ PCR ແລະອຸປະກອນອື່ນໆຕ້ອງໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວ de-RNase.ມັນສາມາດໄດ້ຮັບການແຊ່ນ້ໍາໃນ 0.1% DEPC ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນຄວາມກົດດັນພາຍໃຕ້ຄວາມກົດດັນສູງ.ເອົາໃຈໃສ່ກັບການດໍາເນີນງານໃນ hood fume ໄດ້.tyrants ທ້ອງຖິ່ນໂດຍກົງສາມາດຊື້ເຄື່ອງບໍລິໂພກສໍາລັບການຖອນ enzymes.

PS: ຂ້າພະເຈົ້າບອກທ່ານວິທີການຂີ້ກຽດ.ເຖິງແມ່ນວ່າອຸນຫະພູມສູງແລະຄວາມກົດດັນສູງບໍ່ສາມາດເອົາ RNase ໄດ້ຫມົດ, ມັນຈະເອົາສ່ວນໃຫຍ່ຂອງມັນອອກ.2 ເທົ່າຂອງອຸນຫະພູມສູງແລະຄວາມດັນສູງມີຜົນກະທົບທີ່ດີ, ແລະການສະກັດເອົາ RNA ມີຜົນກະທົບຫນ້ອຍ.

3.ເຫຼົ້າສາມາດທໍາລາຍທາດໂປຼຕີນ,ດັ່ງນັ້ນຕາຕະລາງການສະກັດເອົາ RNA ສາມາດຖືກເຊັດດ້ວຍເຫຼົ້າ 75%. , ແລະຖົງມືຍັງສາມາດສີດດ້ວຍເຫຼົ້າ.

4.ການແກ້ໄຂການລະລາຍ RNA ສຸດທ້າຍແລະທໍ່ centrifuge ຄວນໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍ de-RNase.ນ້ໍາ DEPC ເປັນການແກ້ໄຂການລະລາຍ RNA ທີ່ໃຊ້ທົ່ວໄປ.ໃຫ້ເວົ້າກ່ຽວກັບວິທີການກະກຽມທີ່ຖືກຕ້ອງຂອງນ້ໍາ DEPC (ຈື່ຈໍາການຫຸ້ມຫໍ່ DEPC ການຄ້າຄືນໃຫມ່ເມື່ອທ່ານຊື້ມັນ)

ຕື່ມ DEPC ໃສ່ນ້ໍາບໍລິສຸດທີ່ອຸນຫະພູມ 1: 1000, ສັ່ນໃຫ້ດີ, ປ່ອຍໃຫ້ຢືນຄ້າງຄືນຢູ່ທີ່ 37 ° C, ແລະຂ້າເຊື້ອທີ່ 121 ° C ພາຍໃຕ້ອຸນຫະພູມສູງແລະຄວາມດັນສູງເປັນເວລາ 15 ນາທີ.ນ້ໍາ DEPC ສາມາດເກັບຮັກສາໄວ້ທີ່ -20 ° C ໃນ 1ml aliquots.

ສຸດທ້າຍ, ເພື່ອສະຫຼຸບ: ອຸນຫະພູມຕ່ໍາແມ່ນສໍາຄັນ, ເຄື່ອງບໍລິໂພກຖືກຈັດການໄດ້ດີ, ປະກອບອາວຸດຢ່າງເຕັມທີ່ແລະເວົ້າຫນ້ອຍ!

ດີ, ນັ້ນແມ່ນມັນສໍາລັບຍຸດທະສາດຂອງມື້ນີ້.ຂ້າພະເຈົ້າຕ້ອງການໃຫ້ທ່ານມີຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ RNA ແລະຄວາມບໍລິສຸດທີ່ທ່ານໄດ້ກ່າວມາ.ທັງ A260/A280 ແມ່ນ 2.0!!!

ແນ່ນອນ, ຖ້າທ່ານໃຊ້ aຊຸດສະກັດ RNA ປະຕິບັດງານອຸນຫະພູມຫ້ອງ, ທ່ານອາດຈະບໍ່ພົບບັນຫາຂ້າງເທິງ.

ປະຕິບັດງານຢູ່ໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງ, ໂດຍບໍ່ມີການເພີ່ມ DNase, ສະກັດ RNA ທັງຫມົດອອກຈາກຈຸລັງໃນ 11 ນາທີ, ແລະສະກັດ RNA ທັງຫມົດຈາກເນື້ອເຍື່ອສັດຫຼືພືດໃນ 30 ນາທີ.

ສໍາລັບຕົວຢ່າງການທົດລອງ, ກະລຸນາຕິດຕໍ່:overseas@foregene.com

ຜະ​ລິດ​ຕະ​ພັນ​ທີ່​ກ່ຽວ​ຂ້ອງ:

https://www.foreivd.com/cell-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/animal-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/plant-total-rna/